【摘 要】
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目的：采用超高效液相色谱法(UPLC)研究钩吻素子在肝微粒体的体外代谢,探讨和比较钩吻素子在人与猪、大鼠、猴、犬细胞色素P450酶系代谢特征及其酶抑制剂的影响,为开展体内研究的动物模型选择提供科学依据.方法：通过比较理论塔板数、分离情况及峰面积等指标,建立钩吻素子代谢的UPLC测定条件;通过对孵育时间、肝微粒体蛋白含量和钩吻素子浓度等条件的考察优化钩吻素子与肝微粒体的反应体系;在优化条件下进行钩吻
【机 构】
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福建医科大学,药学院,,福建福州350108;福建医科大学,福建省新药安全性评价中心,福建福州350108
【出 处】
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2016年第六届全国药物毒理学年会
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目的：采用超高效液相色谱法(UPLC)研究钩吻素子在肝微粒体的体外代谢,探讨和比较钩吻素子在人与猪、大鼠、猴、犬细胞色素P450酶系代谢特征及其酶抑制剂的影响,为开展体内研究的动物模型选择提供科学依据.
方法：通过比较理论塔板数、分离情况及峰面积等指标,建立钩吻素子代谢的UPLC测定条件;通过对孵育时间、肝微粒体蛋白含量和钩吻素子浓度等条件的考察优化钩吻素子与肝微粒体的反应体系;在优化条件下进行钩吻素子在各种属肝微粒体中孵育和测定,比较其在各种属的代谢产物种类和相对生成量、酶动力学特征等差异,以及特异性CYP450酶抑制剂对反应系统中代谢产物相对生成量变化的影响.
结果：色谱条件：安捷Poroshell HPH-C18液相色谱柱(2.1mm×100mm,2.7μm),检测波长256nm,测定条件下灵敏度、分离度高,方法学考察显示日内精密度、日间精密度良好,RSD分别小于2.42％和3.61％,回收率大于90％,钩吻素子及各代谢物均能有效分离,钩吻素子保留时间为4.01min,主要代谢物保留时间为1.85min.经全波长扫描(190-400nm)显示连续波长下各成分的构成和分布,表明检测波长256nm下可代表所有代谢产物的分布情况.钩吻素子在人、猪、大鼠、猴、犬肝微粒体的代谢产物分别可检测到2、2、6、6、7种,主要代谢产物(代谢物Ⅴ)相同,占各种属所有代谢物的百分比分别为97.73％、58.09％、89.53％、90.40％和79.06％;其他代谢产物中,除了猪的1个(占41.91％)、犬的2个(分别占6.69％和7.35％)以外,均在3％以下.钩吻素子在人肝微粒体代谢较慢,且仅代谢22.28％,而在犬、猴代谢近50％.在人肝微粒体钩吻素子的酶动力学参数Km、Vmax、T1/2分别为0.15mmol·L-1、0.0055μmol·L-1·min-1和12.01h;猪、大鼠、猴和犬肝微粒体中分别为Km0.44、0.094、0.018和0.73mmol·L-1,Vmax0.014、0.037、0.025和0.061μmol·L-1·h-1·g-1,T1/27.09、3.26、1.80和2.49h.酮康唑在人和不同种属均可显著抑制钩吻素子体外代谢,在人、猪、犬中为强抑制(IC50＜1μmol·L-1),在大鼠、猴为中等抑制(IC50介于1～10μmol·L-1),酮康唑是CYP3A的特异性抑制剂,表明CYP3A是各种属中钩吻素子的主要代谢亚酶.噻氯匹定、奎尼丁和磺胺苯吡唑对大鼠,以及噻氯匹定对猴和犬的钩吻素子体外代谢IC50均高于10μmol·L-1,表明在体情况下CYP2B、CYP2D和CYP2C与钩吻素子的代谢的可能无关.
结论：不同种属肝微粒体对钩吻素子的代谢具有一定的差异,从主要代谢产物分布来看,猪与人的差异显著,大鼠、猴、犬与人相近,但其他代谢产物的构成方面各种属间均有一定的差异,代谢速率和代谢率高低顺序为：猴、犬、大鼠、猪、人.钩吻素子在人和各动物种属(猪、大鼠、犬、猴)肝微粒体中代谢主要由CYP3A酶催化.
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