【摘 要】
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目的 建立一种稳定同位素稀释-气相色谱/质谱法(SID-GC/MS)检测血浆极长链脂肪酸(VLCFAs),以用于X连锁肾上腺脑白质营养不良(X-ALD)诊断.方法 采用液液萃取法进行前处理及硅烷化衍生化方法,以GC/MS测定极长链脂肪酸及内标衍生化产物；数据采用选择离子扫描模式(SIM)采集,以标准品制作标准曲线,同位素内标法定量建立分析方法,进行精密度、不准确度(偏倚)、线性范围、参考区间等方法
【机 构】
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广州市妇女儿童医疗中心内分泌代谢科 510623
【出 处】
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中华医学会2012年医学遗传学年会暨全国第十一次医学遗传学学术会议
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目的 建立一种稳定同位素稀释-气相色谱/质谱法(SID-GC/MS)检测血浆极长链脂肪酸(VLCFAs),以用于X连锁肾上腺脑白质营养不良(X-ALD)诊断.方法 采用液液萃取法进行前处理及硅烷化衍生化方法,以GC/MS测定极长链脂肪酸及内标衍生化产物；数据采用选择离子扫描模式(SIM)采集,以标准品制作标准曲线,同位素内标法定量建立分析方法,进行精密度、不准确度(偏倚)、线性范围、参考区间等方法学验证.并检测了5例经临床和影像学(脑CT或MRI)初步诊断为脑白质营养不良者,并对1例VLCFAs结果异常患者进行X-ALD肾上腺脑白质营养不良蛋白(ALDP)编码基因ABCD1检测.结果 VLCFAs各标准曲线相关系数r2＞0.994.低浓度各种极长链脂肪酸不准确度(偏倚)为12％～18％；中浓度各种极长链脂肪酸不准确度(偏倚)为2.4％～3.8％；高浓度极长链脂肪酸不准确度(偏倚)为0.3％～0.4％.实测值与加入浓度之间的相关系数(r)为：0.997～1.000.低浓度各种极长链脂肪酸批内、批间精密度分别为：1％～3％,1％～5％,中浓度各种极长链脂肪酸批内、批间精密度分别为：1％～6％,5％～7％,高浓度各种极长链脂肪酸批内、批间精密度分别为,1％～2％,4％～5％.线性范围：C22：0 2.5～100μmol/L,C24：0 5～150μmol/L,C26：0 0.125～10μmol/L.已检测的5例脑白质营养不良患者有一例C22：0为70.4μmol/L(参考区间≤96.3μmol/L),C24：0为136.2μmol/L(参考区间≤91.4μmol/L),C26：0为4.4μmol/L(参考区间C26：0≤1.3μmol/L),C24：0/C22：0=1.93(参考区间≤1.39),C26：0/C22：0=0.0625(参考区间≤0.023)除C22：0外其余值均比正常值明显增高,符合X-ALD患者极长链脂肪酸谱变化.该患儿ABCD1基因检测结果：为剪接突变(IVS1+1 G＞A/IVS1+1G＞A),结合极长链脂肪酸谱、基因分析结果、影像学检查和临床表现确诊为X-ALD患者.结论 SID-GC/MS法检测血浆极长链脂肪酸(VLCFAs)含量,具有较好的准确度和稳定性,特异性强,能为临床诊断X连锁肾上腺脑白质营养提供重要的生化依据.
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