hTERTC27基因对神经胶质瘤的杀伤效应

来源 :广东省医师协会第五届神经内科医师大会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:wllzjw
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  目的 研究用树突状细胞携带hTERTC27基因对胶质瘤细胞的杀伤作用及其机理.方法 小鼠骨髓来源的DCs:将C57BL/6小鼠胫骨和股骨的骨髓冲洗下来,利用红细胞溶解液溶解其中的红细胞.然后与重组鼠源的GM-CSF、IL-4和LPS同培养.在第7天,收集培养液中非贴壁细胞作为目的细胞.流式细胞仪检测分析DCs的表型标志物.腺病毒介导的基因转染DCs.提取细胞的蛋白电离后转到硝酸纤维素膜进行蛋白质印迹分析.再进行细胞毒性试验和酶联免疫吸附试验(ELISA)检测白介素-2 (IL-2)和干扰素-Y(IFN-Y)的水平.统计分析采用单因素方差分析法分析,p<0.05认为差异有统计学意义,所有的统计采用SPSS13.0统计学软件进行医学统计学分析.结果 在7天后的细胞培养后,我们收集了出现典型的形态特征的成熟DCs.其结果表明成熟的DCs表达高水平的CD80、CD86和MHC-Ⅱ,其阳性率分别为87.3%、88.8%和93.8%.Ad-C27和Ad-EGFP腺病毒被用于转染DCs,结果荧光显微镜下大多数的DCs表达增强型绿色荧光蛋白(EGFP).而Ad-C27转染48h的DCs,利用抗hTERT的抗体可在蛋白印迹分析中,检测到hTERTC27蛋白的表达.腺病毒转染的树突状细胞刺激的细胞毒性T淋巴细胞,其能力的表现是通过检测它们能否溶解肿瘤细胞.在效应细胞/靶细胞的比率为40∶1时,Ad-C27转染的树突状细胞刺激的细胞毒性超过50%.Ad-C27转染的树突状细胞介导U87细胞的溶解率为50.4±2.95%,远远高于Adv-EGFP转染的树突状细胞介导的38.0±1.81%,以及正常树突状细胞介导的(33.7±2.03%,P< 0.05.T细胞与Ad-C27转染的树突状细胞,Ad-EGFP转染的树突状细胞,以及正常树突状细胞共培养3天,其上清中的IL-2和IFN-Y浓度用ELISA法检测.与AdC27-DCs共培养的T细胞能产生75.54±5.32 pg/ml的IL-2和60.86±2.61 pg/ml的IFN-Y,远远高于其他两组.结论 负载hTERTC27的DCs能提高T细胞上清中IL-2和IFN-Y的水平.对U87神经胶质瘤细胞产生巨大的毒性杀伤作用.
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