不同类型长效EPO对SD大鼠胚胎-胎仔毒性试验研究

• 作 者: 孔卫青 张延林 马金玲 张素才 孙云霞
• 机 构: 北京昭衍新药研究中心股份有限公司生物制品安全性评价北京市重点实验室 北京市经济技术开发区荣京东街甲5号,100176
• 出 处: 2017年第七届药物毒理学年会
• 发表日期: 2017年4期
• 关键词: 人促红素 融合蛋白 胚胎发育 胎仔发育 毒性反应

目的：人促红素(EPO)是由肾脏分泌的一种活性糖蛋白,作用于骨髓中红系造血祖细胞,促进其增殖、分化,从而促进红细胞生成,临床上多用来治疗贫血症.本研究介绍了两种长效EPO融合蛋白(EPO-CTP融合蛋白和EPO-HSA融合蛋白)重复皮下注射给予SD大鼠,对妊娠雌鼠、胚胎及胎仔发育的影响,并了解该药物对大鼠的致畸胎作用,为临床安全性用药提供参考.
方法：两个试验均选用SD雌性大鼠120只，分为对照组、低、中和高剂量组，剂量分别为EPO-CTP融合蛋白20μg/kg,100μg/kg,5OOμg/kg和EPO-HSA融合蛋白20μg/kg, 60μg/kg, 200μg/kg。皮下注射给药，EPO-CTP融合蛋白于孕鼠GD6,GD9. GD12和GD15给药，EPO-HSA融合蛋白于孕鼠GD6和GD13给药，在GD20对孕鼠实施安乐死。试验中对于孕鼠进行临床观察，体重和食量检查，并对孕鼠生殖能力、胚胎-胎仔发育、及胎仔外观、骨骼、内脏进行检查，对孕鼠大体观察异常组织进行组织病理学检查。
结果：孕鼠一般毒性:两种融合蛋白各剂量组孕鼠临床观察、体重和食量均未见给药相关的异常改变。大体解剖观察中，EPO-CTP融合蛋白5OOμg/kg和EPO-HSA融合蛋白200μg/kg剂量组各有2只动物脾脏体积增大，镜检表现为髓外造血。孕鼠生殖能力及胚胎发育指标:与对照组相比，两种融合蛋白各剂量组窝平均黄体数、窝平均着床数、窝平均活胎数、活胎率、总吸收胎率、早期吸收胎率、晚期吸收胎率、着床后丢失率、死胎率以及胎盘异常率均未见毒理学意义的改变。孕鼠未见流产及早产情况的发生。胎仔发育指标:与对照组相比，EPO-CTP融合蛋白各剂量组、EPO-HSA融合蛋白200μg/kg剂量组大部分胎仔发育指标可见统计学意义的改变，包括雌、雄胎仔体重降低，身长和/或尾长减少，或胎仔胎盘重增加。胎仔性别比未见统计学意义的改变。致畸性:骨骼检查中，EPO-CTP融合蛋白各剂量组、EPO-HSA融合蛋白 200μg/kg剂量组胎仔骨骼包括胸骨、骸尾骨、中手骨和/或中足骨等数目减少，胸骨骨化率降低，部分骨骼骨化不全率升高;EPO-HSA融合蛋白20μg/kg和60μg/kg剂量组胎仔骨骼也发生相应改变，发生数目较少、程度较轻，与高剂量组呈剂量相关性。内脏检查中，EPO-CTP融合蛋白5OOμg/kg剂量组胎仔胸腺颈部残留率增加。外观检查中，两种融合蛋白胎仔外观畸形率未见统计学意义的改变。
结论：胎仔骨骼数目和骨化程度是判断胎仔骨骼发育迟缓的重要指标，骨骼数目减少和骨化不全增多均提示骨骼发育迟缓;同时胸腺残留也是判断胎仔内脏发育迟缓的指标之一，胸腺残留率升高提示内脏发育不良。以上胎仔发育指标和骨骼及内脏的改变考虑是由于供试品的药理学作用的放大引起孕鼠的凝血系统功能指标发生改变，从而导致孕鼠血流动力学改变，引起胎盘输送营养物质缓慢，继而导致胎仔营养下降，造成宫内发育迟缓和骨骼及内脏发育不良。在本试验条件下，EPO-CTP融合蛋白500μg/kg, EPO-HSA融合蛋白200μg/kg剂量下，孕鼠脾脏可见与药理作用相关的髓外造血;两种EPO融合蛋白各剂量下均未见胚胎毒性，但可出现由于供试品药理作用放大导致的胎仔宫内发育迟缓、骨骼和/或内脏发育不良。