【摘 要】
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目的 探讨咖啡酸苯乙酯(CAPE)是否可以通过调控核因子E2相关因子2(Nrf2)及抗氧化酶的表达而实现对肺成纤维细胞内氧化应激的改善,从而阻止其异常增殖与胶原分泌.这对于深入探讨肺纤维化的发病机理与防治策略具有重要意义.方法 给予小鼠肺成纤维细胞L929细胞H2O2 10 μmol·L-1及不同浓度的CAPE(1 ～50 μg·ml-1)预处理,24 h后应用RT-PCR与蛋白印迹法分别检测细胞
【机 构】
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第四军医大学预防医学院毒理学教研室,陕西西安710032
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目的 探讨咖啡酸苯乙酯(CAPE)是否可以通过调控核因子E2相关因子2(Nrf2)及抗氧化酶的表达而实现对肺成纤维细胞内氧化应激的改善,从而阻止其异常增殖与胶原分泌.这对于深入探讨肺纤维化的发病机理与防治策略具有重要意义.方法 给予小鼠肺成纤维细胞L929细胞H2O2 10 μmol·L-1及不同浓度的CAPE(1 ～50 μg·ml-1)预处理,24 h后应用RT-PCR与蛋白印迹法分别检测细胞内Nrf2、抗氧化酶γ-谷氨酰半胱氨酸(γ-GCS)、血红素加氧酶(HO-1)、超氧化物歧化酶(SOD)及过氧化氢酶(CAT)基因与蛋白表达水平的变化；应用荧光分光光度计法检测细胞GSH含量,HO-1,SOD,CAT的活性；DCFHDA荧光探针标记结合流式细胞仪检测细胞内活性氧(ROS)水平变化；MTT法与碱水解法检测不同浓度CAPE处理后H2O2对细胞增殖与胶原产物羟脯氨酸含量的作用.结果 H2O2 10 μmol·L-1可刺激L929细胞增殖与胶原分泌(P＜0.05),而12.5μg·ml-1以上CAPE处理后能明显诱导细胞核内转录因子Nrf2积聚,并增加细胞内GSH含量,提高HO-1,SOD及CAT的表达与活性,细胞内ROS水平显著降低(P＜0.05).CAPE组与空白对照组比较,细胞活力也有所升高,胶原产物含量无显著差异；但与单纯H2 O2组比较,细胞活力与胶原产物含量均下降(P＜0.05).结论 抗氧化剂CAPE可以通过诱导的转录因子Nrf2与相关抗氧化酶基因的表达,调节细胞内活性氧水平,减少氧化应激,对维持成纤维细胞的正常生长与胶原分泌功能起到重要作用.
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