【摘 要】
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目的 研究丙烯酰胺(ACR)对Wistar大鼠原代DRG细胞NF-M转运速度的影响并初探其机制.方法 用ACR对原代培养的Wistar乳大鼠背根神经节细胞(DRG)染毒,用四甲基偶氮唑盐(MTT)确定受试物的染毒剂量.将质粒p-GFP-NFM和DsRED共转染进入DRG中,细胞培养48 h后ACR染毒(0,0.14,0.28 mmol· L-1).ACR染毒培养24 h后,将DRG置于荧光显微镜下
【机 构】
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山东大学 公共卫生学院毒理所,山东济南250012 山东大学 公共卫生学院环境与健康系,山东济南2
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目的 研究丙烯酰胺(ACR)对Wistar大鼠原代DRG细胞NF-M转运速度的影响并初探其机制.方法 用ACR对原代培养的Wistar乳大鼠背根神经节细胞(DRG)染毒,用四甲基偶氮唑盐(MTT)确定受试物的染毒剂量.将质粒p-GFP-NFM和DsRED共转染进入DRG中,细胞培养48 h后ACR染毒(0,0.14,0.28 mmol· L-1).ACR染毒培养24 h后,将DRG置于荧光显微镜下,选取共转染成功、状态良好的DRG的平滑近端轴突,每隔30 min记录一次视野内轴突的pGFP-NF-M绿色荧光强度,连续记录2h.将各时间点的pGFP-NFM绿色荧光强度与0 min的荧光强度相比较,计算在该时间段内的绿色荧光强度变化,并以此代表在该时间段内DRG的NFM转运水平.同时检测各ACR染毒组DRG的ATP水平.结果 根据MTT结果,ACR染毒大鼠DRG,其IC50为2.67 mmol·L-1；ACR染毒剂量低于0.70 mmol·L-1时,吸光度(A)与阴性对照组相比无显著性差异(P＞0.05),故在此剂量以下选择ACR染毒剂量进行试验.在30, 60,90和120 min四个时间段内,ACR染毒组(0.14,0.28 mmol· L-1)的NF-M运动速度显著低于阴性对照组(P＜0.01),且0.28 mmol·L-1 ACR染毒组的NF-M转运速度也明显低于0.14 mmol·L-1 ACR染毒组(P＜0.05),在120 min内ACR染毒各组(0,0.14,0.28 mmol·L-1)未被转运的NF-M为(62.64±7.82)％,(74.20±4.09)％,(81.27±5.26)％.ACR染毒组(0.14,0.28 mmol·L-1)的ATP水平分别为(8.68±0.59),(6.76±0.28) mmol ATP·g-1蛋白,低于阴性对照组(10.54±0.50)mmol ATP·g-1蛋白,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 ACR染毒可导致Wistar乳大鼠原代DRG细胞轴突内NFM转运速度减慢,其机制与ACR减少原代DRG内ATP水平有关.
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