【摘 要】
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利用PCR技术从牛分枝杆菌ValleeⅢ菌株中扩增出esat-6、mpb70和mpb83基因,通过重叠延伸剪接技术(SOE)合成mpb70-mpb83融合基因,连接真核表达载体pCDNA3.1(+),构建重组质粒pCDNA-esat-6(简称为pCE6)和pCDNA-mpb70-mpb83-esat-6(简称为pC70-83-E6).体外转染SP2/0细胞,间接免疫荧光检测目的基因的表达情况.然后
【机 构】
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中国农业科学院哈尔滨兽医研究所,兽医生物技术国家重点实验室,动物细菌病研究室,黑龙江,哈尔滨,150001
【出 处】
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中国微生物学会兽医微生物学专业委员会2006年学术年会
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利用PCR技术从牛分枝杆菌ValleeⅢ菌株中扩增出esat-6、mpb70和mpb83基因,通过重叠延伸剪接技术(SOE)合成mpb70-mpb83融合基因,连接真核表达载体pCDNA3.1(+),构建重组质粒pCDNA-esat-6(简称为pCE6)和pCDNA-mpb70-mpb83-esat-6(简称为pC70-83-E6).体外转染SP2/0细胞,间接免疫荧光检测目的基因的表达情况.然后进行动物免疫,实验动物分四组即:pCE6组、pC70-83-E6组、pCDNA3.1(+)组和PBS组,每组10只BALB/c小鼠,pCE6组、pC70-83-E6组和pCDNA3.1(+)组以100μg/只的剂量(胫前肌)免疫,PBS组每只小鼠胫前肌免疫100μl 1 ×PBS,各组均进行了三次免疫,每次间隔两周.间接ELISA检测免疫后小鼠血清特异性抗体水平,MTT法检测免疫小鼠脾淋巴细胞增殖情况和IFN～γ分泌情况.结果表明,两种重组质粒免疫后小鼠血清抗体水平持续上升,而pCDNA3.1(+)组和PBS组的血清抗体始终维持在较低水平,且pC70-83-E6组抗体水平高于pCE6.经PPD(5 μg/ml)刺激后,pCE6组和pC70-83-E6组的刺激值(SI值)与pCDNA3.1(+)组及PBS免疫组相比均差异显著(P＜0.05),而两重组质粒免疫组差异不显著(P＞0.05);PPD刺激后两重组质粒免疫的小鼠脾细胞产生的IFN～γ均显著高于两对照组产生的IFN～γ(P＜0.05),且pC70-83-E6组明显高于其他三组(P＜0.05),pCE6组只分泌很低的IFN～γ,而两对照组则未检测到IFN～γ的产生.本试验成功构建了牛分枝杆菌esat-6基因和mpb70-mpb83-esat-6融合基因DNA疫苗,从而为牛结核病新型疫苗的研制提供了理论依据.
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本研究采用重氮化-偶联法将磺胺嘧啶(SD)与人血清白蛋白(HSA)相连制备了免疫抗原SD-HSA,与卵清白蛋白(OVA)相连制备了包被抗原SD-OVA,用过碘酸钠法将SD-OVA与辣根过氧化物酶(HRP)连接制备了酶标抗原(SD-OVA-HRP).用SD-HSA免疫BALB/c小鼠,经融合、筛选和克隆化制备了单克隆抗体,利用单抗建立了直接竞争ELISA方法:在1ng/mL-729 ng/mL浓度范
选用正交表L16(45)进行正交试验,筛选出植物乳杆菌N3发酵断奶仔猪料的最佳发酵时间、接种量、发酵温度、pH值和湿度.试验结果显示五因素对乳酸产率的影响次序依次为:接种量＞温度＞湿度＞时间＞pH;最佳发酵条件为:接种量10％(106 CFU/ml),温度37℃,湿度65％,时间48h,pH值6.5.
牛蛙皮肤组织为材料获得总RNA,用偶联有Olido(dT)的磁珠纯化mRNA后,利用含SfiⅠ酶切位点的CDSⅢ引物在逆转录酶的作用下合成cDNA的第一链,以含SfiⅠ酶切位点的CDSⅢ引物和SMART引物,利用LD-PCR合成双链cDNA,双链cDNA经SfiⅠ酶切,通过T4DNA连接酶连接到经过相同酶切的λTripIEx2载体,体外包装后转染E.coli XLI-Blue宿主菌,进行滴度测试和
采用混合酸酐法,将本实验室合成的模拟磺胺类药物母核结构的半抗原N-磺胺-4-氨基苯甲酸(SDL),与人血清白蛋白(HSA)相连制备了免疫抗原(SDL-HSA),与卵清白蛋白(OVA)相连制备了包被抗原(SDL-OVA).用SDL-HSA免疫BALB/c小鼠,经融合,筛选和3次克隆得到了分泌抗磺胺类药物单克隆抗体的杂交瘤细胞株.间接竞争ELISA表明,该单抗能用于多种磺胺类药物残留的免疫分析.
研究了自制中草药免疫增效剂--"疫佳灵"对单核细胞、嗜酸性白细胞吞噬白色葡萄菌能力的影响.将12日龄海兰褐公鸡60只随机分成3组,即试验Ⅰ组,试验Ⅱ组和对照组.Ⅰ组为饮水中中草药免疫增效剂的终浓度为1％;Ⅱ组为饮水中中草药免疫增效剂的终浓度为0.5％;对照组只自由饮水,不加任何药物成分.在第22、32、42、52、62日龄时翅下采血,涂片,镜检.结果表明:1％组的效果最好,优于0.5％组,差异极显
2005年夏秋季从广东地区病死猪体内分离到2株猪源链球菌,并进行了病原学研究.细菌在形态上呈链球菌的特征,α溶血,两分离株的生化试验结果相似,且都不与A～G链球菌群特异性血清发生凝集.经PCR鉴定,结果一株为猪链球菌2型,另一株为猪链球菌9型.动物试验结果表明,2型分离株对小鼠的毒力较低,但能在接种细菌5～15天后使小鼠发病致死;9型分离株对小鼠有较强毒力,能使小鼠接种细菌5天内发病死亡,其对小鼠
根据实际应用情况确定ND、H9半成品的细菌内毒素限值为每1mL中含内毒素量应小于35EU.经干扰试验确证,ND、H9半成品在140倍稀释后对细菌内毒素检查无干扰作用.按拟订标准检验,本品共批26样品,其中批号为060421、060426、060427、060601、060602、060603样品其细菌内毒素检查结果符合规定,其余20批样品细菌内毒素检查不符合规定.
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