【摘 要】
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背景 家族性高胆固醇血症(FH)是一种常染色体显性遗传疾病，患者血浆胆固醇水平极度增高，动脉粥样硬化发展迅速，且多发生早发冠心病.FH主要是由低密度脂蛋白受体(LDLR)突变所致.LDLR是一种细胞表面糖蛋白，通过受体介导的内吞作用特异性结合并内吞合载脂蛋白B100 (ApoB100)或载脂蛋白E(ApoE)的脂蛋白，可将约70％的低密度脂蛋白胆固醇(LDLC)转入细胞.截至目前，世界范围内已报道
【机 构】
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首都医科大学附属北京安贞医院北京市心肺血管疾病研究所动脉硬化研究室,北京市100029 首都医科大
【出 处】
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第十二次全国动脉硬化性疾病学术会议
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背景 家族性高胆固醇血症(FH)是一种常染色体显性遗传疾病，患者血浆胆固醇水平极度增高，动脉粥样硬化发展迅速，且多发生早发冠心病.FH主要是由低密度脂蛋白受体(LDLR)突变所致.LDLR是一种细胞表面糖蛋白，通过受体介导的内吞作用特异性结合并内吞合载脂蛋白B100 (ApoB100)或载脂蛋白E(ApoE)的脂蛋白，可将约70％的低密度脂蛋白胆固醇(LDLC)转入细胞.截至目前，世界范围内已报道了1000多种LDLR突变(http：//www.ucl.ac.uk/fh and http：//www.umd.necker.fr).针对LDLR的突变，国外已采用突变体表达、流式细胞术及激光共聚焦(CLSM)等方法研究其致病机制.而国内大多局限于基因突变的检测，尚未开展致病机制的研究.深入研究FH发病机制对于寻找新的治疗靶点具有重要意义.目的 为深入研究FH患者发病机制，对2例无血缘关系的临床确诊FH黄瘤患者进行基因检测，并对相对应的突变受体进行细胞转染，用激光共聚焦显微镜及流式细胞术检测突变受体对LDL代谢功能变化，以阐明其发病机制.方法 收集2例符合临床诊断标准的FH患者及其父母临床资料及血样本，检测其血脂水平；用酚氯仿法提取外周血基因组DNA；应用多聚酶链反应扩增结合DNA直接测序，检测LDLR基因的编码区(包括启动子、18个外显子及剪接位点)、ApoB100的R3500Q位点，确定突变位点；应用定点诱变技术对突变基因进行定点诱变；将突变体转入人胚肾(HEK293)细胞中，用激光共聚焦显微镜观察突变蛋白的细胞定位；用流式细胞术检测LDLR蛋白表达及内吞LDL活性变化.结果 (1)2例先证者及其父母血脂水平均显著升高，结合其黄色瘤及动脉粥样硬化表现，符合FH诊断标准.(2)基因测序显示2例患者均发生了LDLR点突变，分别为第4外显子及第13外显子发生点变化，其中第13外显子点突变在国内外均未见报道，为新突变；第4外显子点突变在国内为第一次报道.(3) CLSM结果显示两种突变均部分滞留于内质网，且尚保留一定的内吞活性.(4)流式细胞术结果显示细胞表面LDLR表达量及内吞活性均显著下降(P＜0.05).结论 2例FH先证者均发生LDLR基因突变，在中国均未见报道，这一结果可丰富中国人群FH数据库.通过功能研究，显示两种突变均造成LDLR表达及内吞活性显著降低，为致病性突变.这两种突变主要是由LDLR转运缺陷造成受体在内质网滞留，不能有效地转运至细胞膜表面发挥其作用，进而降低其对LDLC的清除，从而导致胆固醇增高的发生.这一FH发病机制的研究能对FH的靶向治疗提供一定帮助.
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