【摘 要】
：
目的:探讨Erlotinib获得性耐药的非小细胞肺癌细胞株HCC827-TR的相关耐药机制.方法:体外培养人肺腺癌细胞株HCC827并采用Erlotinib诱变和药物筛选建立Erlotinib获得性耐药细胞株HCC827-TR,四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测HCC827-P和HCC827-TR细胞对Erlotinib的敏感性,抽取基因组DNA筛选两株细胞间的差异基因,抽提基因组DNA、RNA,对表
【机 构】
：
天津医科大学总医院肿瘤科 天津肺癌研究所
论文部分内容阅读
目的:探讨Erlotinib获得性耐药的非小细胞肺癌细胞株HCC827-TR的相关耐药机制.方法:体外培养人肺腺癌细胞株HCC827并采用Erlotinib诱变和药物筛选建立Erlotinib获得性耐药细胞株HCC827-TR,四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测HCC827-P和HCC827-TR细胞对Erlotinib的敏感性,抽取基因组DNA筛选两株细胞间的差异基因,抽提基因组DNA、RNA,对表皮细胞生长因子受体(EGFR)基因19-2l外显子进行聚合酶链反应(PCR)扩增及测序,对c-MET基因、PTEN基因进行扩增,采用Western blot法检测HCC827-P和HCC827-TR细胞中pERK和p-AKT蛋白的表达水平.结果:(1)MTT方法检测结果表明,HCC827-P的半数致死率＜100nM,而HCC827-TR细胞的半数致死率＞20000Nm;(2)基因芯片的结果示,两株细胞间存在与肺癌相关的差异基因;(3)PCR、RT-PCR检测结果,两株细胞均无EGFR-T790M二次突变,两株细胞的c-MET基因拷贝数、c-MET基因表达量、PTEN基因表达量无差异,Western-blot结果显示:p-ERK、p-AKT在两株细胞内表达无差异,而Erlotinib可显著抑制HCC827-P细胞内的两种蛋白,而在HCC827-TR 细胞内抑制作用不明显.结论:(1)成功制备了HCC827-TR耐药细胞系.(2)基因芯片的分析结果为进一步研究耐药机制提供了很好的方向指导.(3)HCC827-TR对Erlotinib耐药与EGFR T790M突变无关;与PTEN表达缺失无关;与MET基因扩增的关系尚不明确,待进一步探讨.(4)HCC827-P细胞内Erlotinib可显著抑制EGFR下游信号通路,而对HCC827-TR细胞抑制作用不显著.
其他文献
目的:本实验拟进一步揭示LCMR1与DEK的结合区域,并借助相互作用蛋白DEK功能区提供的线索,开展LCMR1功能研究,探讨其在细胞凋亡中的作用及作用机制,为在基因水平预防和治疗肺癌寻找新的分子靶点,为抗癌药物的研发和肺癌治疗提供线索和分子基础。方法:构建DEK(N端)功能区质粒及DEK(C端)功能区质粒,使用TNT兔网织红细胞裂解液体系,在体外快速转录翻译DEK(N端)功能区蛋白及DEK(C端)
目的:探讨肺癌中SWI/SNF染色质重组复合物异常调节的现象和机制,两个ATP酶催化蛋白BRG1(SMARCA4)和BRM(SMARCA2),以及辅助蛋白BAF250a(ARID1A)在SWI/SNF染色质重组中的作用及分子机制。方法:来自吸烟者与非吸烟者的101例肺癌细胞株和83例非小细胞肺癌及配对良性肺组织样本用于此项研究;应用NextGen测序和Sanger测序技术用于对肺癌细胞株DNA的S
目的:分析中国NSCLC患者中EML4-ALK融合基因的阳性率、亚型分布情况及其相关的临床病理生理特征，并进一步探讨EML4-ALK融合基因在肺癌中的生物学功能;在前期工作基础上进一步深入探讨BTG2基因在肺癌发生发展中的作用机制，为寻找新的肺癌生物治疗提供理论依据。方法:以H2228和PC-9以及其衍生的人肺腺癌细胞株为研究对象，应用分子克隆技术、质粒转染、MTT、流式细胞仪等技术和方法，初步探
目的:本研究的目的是探讨Kindlin-1和Kindlin-2在临床肺癌发生发展中的作用及相关机制。方法:应用免疫组化、Westernblotting、RT-PCR检测临床不同组织学类型肺癌组织标本中Kindlin-1和Kindlin-2蛋白和mRNA表达水平及差异;应用Western blotting、RT-PCR检测检测肺癌细胞株中Kindlin-1和Kindlin-2蛋白和mRNA表达水平;
目的:探讨青年(≤40岁)非小细胞肺癌(NSCLC)患者的临床特点、手术疗效,分析影响预后的因素。方法:回顾性分析苏州大学附属第四医院2000年1月至2009年12月经手术治疗48例40岁以下青年NSCLC患者的临床资料,其中男31例,女17例;年龄(32±6)岁。29例术前明确为NSCLC,12例术前高度怀疑为肺癌,7例误诊为肺良性疾病;手术根治性切除37例,姑息性切除9例,手术探查2例。结果:
研究背景:Ⅱ期-N1非小细胞肺癌中,不同淋巴结转移情况,包括:不同淋巴结站(10/11组与12-14组),转移淋巴结占所有清扫淋巴结的比例(LNR),转移淋巴结的个数,对于患者预后的影响值得进一步探索T.研究方法:回顾性分析1999年-2009年206例Ⅱ期(T1a-T2bN1M0) NSCLC的数据,使用Kaplan-Meier方法计算OS与DFS,多因素回归分析了解不同淋巴结转移情况对患者预后
目的:国际癌症研究机构已将结晶型二氧化硅规定为人类第一类致癌物质,是因吸入肺部后导致肺纤维化而诱发癌症.但是,这种自然产出的二氧化硅颗粒物吸入肺部后导致肺损伤甚至是肺癌的机制目前尚不清楚.模拟宣威地区女性人群暴露二氧化硅颗粒物的自然情况,进行长时间-低浓度经气管滴注工业合成的纳米二氧化硅颗粒物的大鼠诱癌试验,以期能探索自然产出的二氧化硅颗粒物可能的致癌机制.方法:(1)选取宣威肺癌高发区开采和使用