【摘 要】
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本研究旨在分离猪源弓形虫虫株并对其对生物学特性进行研究.采用国际标准株RH株经腹腔接种ICR小鼠,3～5d后采集小鼠腹水,经CF-11纤维素柱纯化速殖子,提取虫体DNA.以B1基因和529bp重复片段序列做为靶点基因,分别进行了单基因和双基因PCR扩增,并优化PCR反应体系.结果表明529重复片段比B1基因的敏感性高10倍,前者相当于可检测0.9个速殖子,后者可检测9个速殖子；双重PCR可检测到约
【机 构】
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扬州大学兽医学院,江苏扬州225009 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所,北京100193
【出 处】
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中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第七次代表大会暨第十二次学术研讨会
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本研究旨在分离猪源弓形虫虫株并对其对生物学特性进行研究.采用国际标准株RH株经腹腔接种ICR小鼠,3～5d后采集小鼠腹水,经CF-11纤维素柱纯化速殖子,提取虫体DNA.以B1基因和529bp重复片段序列做为靶点基因,分别进行了单基因和双基因PCR扩增,并优化PCR反应体系.结果表明529重复片段比B1基因的敏感性高10倍,前者相当于可检测0.9个速殖子,后者可检测9个速殖子；双重PCR可检测到约90个速殖子.对临床上出现高温、呼吸困难等症状以及剖检在肝脏、肺脏、淋巴结、肠道等有出血、坏死等病变的兽医院门诊病猪进行了弓形虫检测.从25例病死猪中检出5例阳性,阳性率达20％.对两株猪源弓形虫分离株的ITS及5.8S基因进行了克隆及序列分析,并与GenBank上登录的RH株及其他弓形虫株的ITS序列进行比较,结果表明弓形虫种内ITS序列存在极少变异,具有高度保守性.对弓形虫及外源参考群的ITS和ITS-1序列构建N-J进化树分析,结果显示ITS序列适于弓形虫与其他原虫的种间鉴定,但不适合用于弓形虫种内遗传变异的研究.
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