【摘 要】
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目的 癌基因K-ras在肿瘤中调控细胞增殖及代谢转化中发挥重要的作用.近年来发现K-ras还影响肿瘤细胞内线粒体的改变.本研究旨在研究K-ras突变的细胞中线粒体能量代谢方面的改变.方法 采用通过同源重组方法构建的K-rasG12D突变的成纤维细胞系,应用流式细胞仪和光谱分析法,分别检测细胞和纯化的线粒体数量的改变.激光共聚焦显微镜观察线粒体形态.提取线粒体,采用荧光素酶法检测加入不同代谢底物后线
【机 构】
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中国医学科学院医药生物技术研究所肿瘤室 北京100050
【出 处】
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2015医学前沿论坛暨第十四届全国肿瘤药理与化疗学术会议
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目的 癌基因K-ras在肿瘤中调控细胞增殖及代谢转化中发挥重要的作用.近年来发现K-ras还影响肿瘤细胞内线粒体的改变.本研究旨在研究K-ras突变的细胞中线粒体能量代谢方面的改变.方法 采用通过同源重组方法构建的K-rasG12D突变的成纤维细胞系,应用流式细胞仪和光谱分析法,分别检测细胞和纯化的线粒体数量的改变.激光共聚焦显微镜观察线粒体形态.提取线粒体,采用荧光素酶法检测加入不同代谢底物后线粒体的ATP产生量.酶法检测琥珀酰辅酶A合成酶(A-SCS)的活性.Western blot法检测A-SCS蛋白的表达水平.结果 与野生型成纤维细胞相比,K-rasG1 2D突变的成纤维细胞系DF/K-rasG12D中,线粒体含量增多,形态多成点状,颗粒状.把几种常见的三羧酸循环代谢底物与分离的DF/K-rasG12D细胞线粒体孵育15min,发现柠檬酸能使DF/K-rasG12D细胞产生6倍的ATP.分析参与线粒体中柠檬酸代谢的几种酶活性,发现在DF/K-rasG12D细胞中A-SCS的活性增强,蛋白表达水平增高.结论 K-ras突变可以促使细胞线粒体数量增强,通过上调琥珀酰辅酶A合成酶表达和活性使细胞能生ATP增多,从而为肿瘤细胞的快速生长提供能量.这个发现为K-ras突变引起肿瘤细胞代谢方式的改变提供了一条全新的机制.
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