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miRNA是生物体内长约22nt的一种内源性RNA,调节哺乳动物60％基因.miRNA通过与靶基因3端非翻译区(UTR)结合,导致靶mRNA的降解或抑制翻译.前期的研究结果显示,蓝塘猪的肌肉和脂肪中miR-181a的表达比长白猪高,推测miR-181a可能参与调节皮下脂肪及肌间脂肪的形成.利用生物信息学分析发现其潜在的靶基因可能为TNF-α；此外,亦发现TNF-α的表达可能同时受到其他几种miRNAs的调控.因此,本研究通过构建PGL3-TNF-α 3UTR质粒及其突变质粒PGL3-TNF-α3UTR-muta,利用荧光素酶报告基因对miR-181a等参与调控TNF-α表达进行验证.结果表明miR-19a,miR-124,miR-130a和miR-181a与TNF-α之间存在靶对应关系(P＜0.05或P＜0.01).在TNF-α表达较为丰富的细胞系Hela细胞中分别过表达miR-124,miR-130a和miR-181a,Western blot检测细胞内源TNF-α蛋白含量,发现miR-130a和miR-181a能抑制细胞中TNF-α翻译.培养猪皮下脂肪前体细胞并诱导聚脂,qRT-PCR检测不同诱导天数miR-130a,miR-181a和TNF-α细胞的表达,发现miR-181a和TNF-α之间的表达趋势变化一致.猪脂肪前体细胞中转染miR-181a mimics发现其虽然水平与诱导天数呈线性负相关,但第8天时,miR-181a的表达仍极显著高于对照组(P＜0.01),而转染miR-181a inhibitor细胞miR-181a水平显著低于对照组(P＜0.01).在猪皮下脂肪前体细胞中过表达miR-181a,发现内源TNF-α翻译受到抑制,细胞脂滴数量增加,甘油三酯含量升高(P＜0.05).受TNF-α抑制的基因LPL、PPARγ、adiponectin、FASN、GLUT1、GLUT4、PDE3B、ATGL及HSL的表达均显著上调(P＜0.05或P＜0.01),而miR-181a inhibitor则使上述基因均显著下调(P＜0.05或P＜0.01).猪脂肪前体细胞中过表达miR-130a结果与miR-181a相反,细胞脂滴数量减少,TG含量下降,并受TNF-α抑制的基因LPL、PPARγ、 adiponectin、FASN、GLUT1、GLUT4和PDE3B的表达均显著下调(P＜0.01).miR-181a与TNF-α3UTR之间存在靶对应关系,能通过抑制TNF-α的翻译促进PPARγ的表达,从而促进猪皮下脂肪细胞的分化.综上所述,本研究通过全面挖掘猪垂体、肌肉及脂肪中表达的miRNA,比较分析肥胖型与瘦肉型猪肌肉与脂肪miRNA表达的差异,并验证差异表达基因miR-181a通过TNF-α抑制脂肪分化,旨在揭示垂体生长调控和脂肪调控的新机制,为我国地方猪品种的肉质形成提供理论依据.