【摘 要】
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为探索并建立一种能够快速有效地检测结核分枝杆菌的方法,本研究联合应用结核分枝杆菌的特异性抗原ESAT-6和CFP-10的单克隆抗体与胶体金免疫层析技术相结合,采用双抗体夹
【机 构】
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浙江工业大学药学院,杭州市潮王路18号,310014
【出 处】
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2015中国转化医学大会暨中国转化医学联盟成立大会
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为探索并建立一种能够快速有效地检测结核分枝杆菌的方法,本研究联合应用结核分枝杆菌的特异性抗原ESAT-6和CFP-10的单克隆抗体与胶体金免疫层析技术相结合,采用双抗体夹心法建立了检测结核分枝杆菌的GICA方法,成功研制了结核分枝杆菌胶体金免疫层析试纸条,试纸条灵敏度、特异性、稳定性等均达到检测要求.本研究应用柠檬酸三钠还原法制备胶体金,胶体金标记抗体经纯化后吸附在玻璃纤维素膜上；将单克隆抗体(检测线)和羊抗鼠IgG(质控线)分别包被在硝酸纤维素膜上.分别经过处理干燥后与样品垫、吸水纸组装成双面试纸条.经过摸索,针对ESAT-6单抗,选用直径20nm左右的胶体金来标记抗体,3D4G4和10-G10的最适pH值分别为为6.0和6.5,最适抗体稳定量分别为为4.8μg/mL和7.2μg/mL.针对CFP-10的单抗,粒径为18.6 nm的胶体金最适合用来标记3D4G4,胶体金最佳标记pH为5.5,3D4G4抗体最适标记量为每毫升胶体金7.2μg,4D6C9的最适包被浓度为200μg/mL.采用CB06玻璃纤维膜作为金吸附材料,NCl40硝酸纤维素膜作为层析材料,SB06作为样品垫制成试纸条.实验证明试纸条不与其他非相关疾病的阳性血清反应,具有较高的特异性.试纸条最低检测浓度达到2.4ng/mL,室温下最多保存6个月.
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