【摘 要】
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目的：通过体外原代培养大鼠大脑皮层细胞,并在不同氧浓度环境下处理不同时间,检测不同条件下细胞培养液内IL-6、TNF-α蛋白水平,探讨低氧对大鼠大脑皮层细胞分泌IL-6、TNF-α的影响.方法：分离新生24h内SD大鼠大脑皮层并进行体外细胞培养,以密度(5.5 ～7.5) ×105细胞/ml将细胞接种于48孔培养板中.实验设1％、4％两个低氧浓度和3h、6h两个低氧处理时间,1％和4％氧浓度环境处
【机 构】
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上海体育学院运动科学学院,上海200438
【出 处】
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2012年中国运动生理生化学术会议
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目的：通过体外原代培养大鼠大脑皮层细胞,并在不同氧浓度环境下处理不同时间,检测不同条件下细胞培养液内IL-6、TNF-α蛋白水平,探讨低氧对大鼠大脑皮层细胞分泌IL-6、TNF-α的影响.方法：分离新生24h内SD大鼠大脑皮层并进行体外细胞培养,以密度(5.5 ～7.5) ×105细胞/ml将细胞接种于48孔培养板中.实验设1％、4％两个低氧浓度和3h、6h两个低氧处理时间,1％和4％氧浓度环境处理3h均标记为H3,处理6h均标记为H6,各低氧处理组均设相应的常氧(20％氧浓度)对照,标记为C3、C6.细胞在孵箱(37℃、95％空气、5％ CO2)中培养5天后,放入低氧工作站(Invivo2 200型,英国Don Whitley Scientific公司),按设定的低氧浓度和低氧时间分别处理细胞,处理结束后收集各组细胞培养液,用ELISA方法检测IL-6、TNF-α水平(Eonc型全自动酶标仪,美国BioTeck公司；试剂盒购于美国eBioscience公司).每个实验独立重复3次.实验数据采用SPSS17.0统计学软件进行分析,采用单因变量多因素方差分析判断实验组与对照组间的显著性差异,显著性水平为P ＜0.05,非常显著性水平为P＜0.01.结果：1)1％氧浓度处理大脑皮层细胞3h和6h均可明显抑制细胞分泌IL-6,各组IL-6的水平分别为C3：176.17±3.40pg/ml,H3：155.68±1.96pg/ml,C6：166.49 ±4.76pg/ml,H6：155.34±3.69pg/ml；4％氧浓度处理大脑皮层细胞3h对细胞分泌IL-6无影响,但有抑制的趋势,处理6h可明显抑制细胞分泌IL-6,各组IL-6的水平分别为C3：322.50±11.76pg/ml, H3： 312.72±11.06pg/ml, C6：303.56±7.59pg/ml, H6：281.16 ± 3.41 pg/ml.2)1％氧浓度环境处理大脑皮层细胞3h和6h对细胞分泌TNF-α无影响,各组TNF-α水平分别为C3：108.77±14.18pg/ml,H3：111.00±6.32pg/ml,C6：113.88±13.19pg/ml,H6：128.40±27.83pg/ml；4％氧浓度环境处理大脑皮层细胞3h和6h对细胞分泌TNF-α无影响,但有抑制的趋势,各组TNF-α水平分别是C3：113.23±9.34pg/ml, H3： 107.92±11.83pg/ml, C6： 113.46±7.54pg/ml, H6： 105.09±18.04pg/ml.结论：1)低氧对皮层细胞分泌IL-6的影响受氧浓度和低氧处理时间的双重影响,氧浓度越低,处理时间越长则抑制作用越明显.2)1％ O2和4％ O2两个低氧浓度在处理细胞3h和6h后皆对大鼠大脑皮层细胞分泌TNF-α无明显影响.
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