【摘 要】
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目的 研究富含脯氨酸的酪氨酸蛋白激酶2(Pyk2)在Ca2+载体—离子霉素(Ionomycine)作用下对PC12细胞中神经递质的释放的影响.方法 通过RNA干扰实验对PC12细胞中Pyk2表达进
【机 构】
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中国医学科学院药物研究所,北京100050
【出 处】
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第十六届全国神经精神药理学学术会议
论文部分内容阅读
目的 研究富含脯氨酸的酪氨酸蛋白激酶2(Pyk2)在Ca2+载体—离子霉素(Ionomycine)作用下对PC12细胞中神经递质的释放的影响.方法 通过RNA干扰实验对PC12细胞中Pyk2表达进行抑制,结合神经递质释放实验、免疫共沉淀、免疫印迹和细胞免疫荧光等方法明确Pyk2磷酸化与神经递质释放的相关性及其机制.结果 PC12细胞在离子霉素的作用下,多巴胺(DA)及谷氨酸(Glu)释放明显增多,在2 min达峰值(DA：占总含量的2.67％±0.412％； Glu：占总含量的7.12％±1.28％,之后迅速下降,6 min以后已接近基线水平(DA：占总含量的0.313％±0.0527％； Glu：占总含量的2.42％±0.458％.而PC12细胞中通过RNA干扰技术预先干扰Pyk2的表达,可明显抑制DA的释放(2 min时占总含量的0.541％±0.1247％).Western和共聚焦结果均显示离子霉素可引起Pyk2的磷酸化,其402位酪氨酸磷酸化在90 s荧光值最高,之后逐渐下降.而Pyk2其他三个酪氨酸磷酸化位点(579,580,881)未见明显变化.通过构建Pyk2不同酪氨酸磷酸化位点的突变体Pyk2-Y402F,Pyk2-Y579F,Pyk2-Y580F,Pyk2-Y881 F检测各位点在离子霉素引起的递质释放中的作用,同样验证了Y402位的关键性.结论 酪氨酸激酶Pyk2的402位酪氨酸残基磷酸化在离子霉素诱导的神经递质释放过程中具有重要作用,对其进一步的研究可能为PD等神经递质紊乱所致的神经退行性疾病提供新的治疗策略.
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