【摘 要】
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目的:探讨成纤维细胞激活蛋白(FAP)RNAi慢病毒载体的构建. 方法:设计5个靶向FAP的RNA干扰靶点序列(Target 1、2、3、4、5),构建靶向FAP的RNA干扰载体和FAP过表达载体,共转
【出 处】
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2013国际暨全国第十二届头颈肿瘤学术大会
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目的:探讨成纤维细胞激活蛋白(FAP)RNAi慢病毒载体的构建.
方法:设计5个靶向FAP的RNA干扰靶点序列(Target 1、2、3、4、5),构建靶向FAP的RNA干扰载体和FAP过表达载体,共转染293T细胞进行外源筛靶,采用Western blot检测FAP蛋白表达情况,判断不同靶点的干扰效果,选择两条最佳RNAi有效靶点序列,制备靶向FAP的慢病毒载体,并将其转染KB细胞,流式细胞仪分选获GFP+细胞,Real time RT-PCR和Western blot检测FAP mRNA和蛋白表达水平,以MTr法测定KB细胞生长曲线.
结果:成功构建FAP表达质粒及FAP过表达载体质粒,在KB细胞中能显著抑制FAP蛋白的表达和KB细胞的生长.
结论:成功构建两条靶向FAP慢病毒载体sh-FAP1和sh-FAP2.
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