【摘 要】
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[目的]苯甲酰脲类昆虫生长调节剂抑制昆虫表皮几丁质合成酶和尿苷辅酶,阻断N-乙酰葡糖胺(GlcNAc)单体聚合形成几丁质,昆虫因表皮中几丁质微纤维形成受阻而异常蜕皮,幼虫
【机 构】
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华东理工大学药学院,上海市化学生物重点实验室,上海200237
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[目的]苯甲酰脲类昆虫生长调节剂抑制昆虫表皮几丁质合成酶和尿苷辅酶,阻断N-乙酰葡糖胺(GlcNAc)单体聚合形成几丁质,昆虫因表皮中几丁质微纤维形成受阻而异常蜕皮,幼虫在生长发育和蜕皮变态过程中死亡.本文拟通过研究定虫隆对昆虫卵巢Tn5B1-4和Sf-21细胞以及人胚肾Hek293细胞和肝癌HepG2细胞的增殖行为和细胞周期等作用规律,阐明几丁质聚合过程对定虫隆细胞毒性的影响,同时探明定虫隆对昆虫细胞具有很高选择性毒性而对人体细胞良性的初步机制.[方法]采用血球计数法测定细胞增殖；采用台盼蓝排除法测定细胞活力；采用MTT法测定定虫隆对细胞的持续抑制活性；采用DMAB标记分光光度法测定GlcNAc含量；采用流式细胞术测定细胞周期和细胞凋亡；采用酸性吉姆萨染色法检测有丝分裂细胞.[结果]暴露48和96 h时,定虫隆抑制Tn5B1-4和Sf-21细胞增殖的IC50值分别为4.96和1.12μM,2.37和1.76 μM,而对Hek293和HepG2细胞增殖的IC50值均大于20μM.将受抑制的细胞转入不含定虫隆的细胞培养基中培养,Tn5B1-4和Sf-21细胞生长在24 h内仍处于持续抑制状态,而Hek293和HepG2细胞则加速生长至对照水平.另外,定虫隆引起Tn5B1-4和Sf-21细胞中GlcNAc与蛋白水平的比值下降大于1.8倍,有丝分裂指数下降大于1.5倍,并且引起细胞G2/M期阻滞.研究表明,Hek293和HepG2细胞中不含有GlcNAc单体,定虫隆对Hek293和HepG2细胞周期和有丝分裂没有显著影响.[结论]昆虫细胞与人体细胞在GlcNAc含量、G2/M期阻滞、有丝分裂指数等方面对定虫隆毒性的响应都具有显著的差异,具有几丁质生理特性可能是定虫隆对昆虫细胞表现高选择毒性的原因.
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