【摘 要】
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[目的]华北大黑鳃金龟既定之脱乙酰基酶5属于第3类,据报道只有几丁质结合区一个结构域,本实验想通过RACE方法获得其全长,并与载体链接,研究其功能。[方法]通过对几种鞘翅
【机 构】
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河北农业大学植物保护学院,河北保定071001北京农学院植物科学技术学院,北京102206
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[目的]华北大黑鳃金龟既定之脱乙酰基酶5属于第3类,据报道只有几丁质结合区一个结构域,本实验想通过RACE方法获得其全长,并与载体链接,研究其功能。[方法]通过对几种鞘翅目昆虫几丁质脱乙酰基酶基因序列比对,找出相似性较高的区域设计引物,以华北大黑鳃金龟(Holotrichia oblita Fald)的cDNA为模板,进行PCR扩增,获得774 bp的片段,采用RACE技术从华北大黑鳃金龟总RNA中克隆出HoCDA5基因的3及5末端片断,并根据测序结果,设计基因全长引物获得了HoCDA5基因全长。[结果]结果表明,该基因全长1 259 bp,含开放阅读框1 140 bp,编码406个氨基酸；与华北暗黑鳃金龟的氨基酸序列相比,同源性高达96％。将HOCDA5基因定向插入pET28a质粒中构建成原核表达载体,重组质粒转化大肠杆菌BL21感受态细胞。同时将HoCDA5基因定向插入pFastBac1质粒中构建成真核表达载体,重组质粒大肠杆菌DH 10B ac感受态细胞。
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