实时荧光PCR检测旋毛虫方法的建立与初步应用

来源 :第二届全国人畜共患病学术研讨会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:liyang0ly
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本研究根据本实验室前期扩增的各旋毛虫隔离种线粒体LB*rRNA基因序列。设计了一对特异性引物及TaqMan MGB探针。以Ls-rRNA阳性重组质粒为模板,建立了实时荧光PCR检测旋毛虫的方法。该方法只能在各旋毛虫隔离种DNA样本中检测到荧光信号,对小鼠、狗和猪正常肌肉组织、猪鞭虫、猪蛔虫、猪钩虫、犬蛔虫等DNA检测,不出现非特异性荧光信号;最小检出量为1.32×102拷贝数和105条旋毛虫,建立的标准曲线拟合良好,扩增方程Y=-3.43X+19.70,相关系数R2=0.9984,扩增效率为95%;对平行复管检测,组内变异系数为1.11%(n=20),同一组不同浓度梯度样本(n=9)间隔30d重复检测,结果无显著性差异;对人工感染不同剂量猪旋毛虫的小鼠肌肉可在攻虫14d后100%检出,对送检狗肉样品可从压片镜检、人工胃液消化、胶体金试纸条检测结果为阴性的63个狗肉样本中敏感地检出8个阳性。
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