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目的:制备猪带绦虫囊尾蚴TS-CC18重组抗原并对其生物学活性进行鉴定,为建立猪囊尾蚴检测技术提供诊断抗原。
方法:PCR扩增获得TS-CC18编码基因,构建pET30a-TS-CC18重组表达载体,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导筛选高表达量菌株。表达蛋白采用Ni-FF亲和层析方法纯化。通过Western-blotting及间接ELISA检测重组蛋白的反应活性。
结果:Tricine-SDS-PAGE表明,0.5 mmol/L IPTG诱导6h,可稳定表达可溶性TS-CC18重组蛋白;薄层扫描分析其表达量约占菌体总蛋白的20%以上。Westem-blotting检测诱导的蛋白能与猪囊尾蚴阳性血清发生特异性反应。间接ELISA检测血清抗体结果表明:纯化的TS-CC18重组蛋白与全囊抗原的相对特异性达到100%,相对敏感性达84%。总符合率为94.3%,表明TS-CC18重组蛋白具有较高的特异性和敏感性。
结论:成功制备了猪囊尾蚴TS-CC18重组抗原,特异性、敏感性及稳定性良好,对诊断猪囊尾蚴病及开发诊断制剂具有潜在应用价值。