论文部分内容阅读
目的:本研究采用新生1 d SD大鼠来获取纯化的少突胶质细胞(oligodendrocyte,OL)前体细胞,并进行IFN-γ干预观察对OL前体细胞的影响,对进一步阐明PVL的发病机制具有重要意义。
方法:采用振荡法分离纯化OL前体细胞,分别以10ng/ml、30ng/ml、60ng/ml、80ng/ml IFN-γ刺激OL前体细胞,采用Hoechst 33258凋亡染色,紫外光激发下观察细胞凋亡情况;MrT法活细胞记数;免疫荧光鉴定细胞类型以及测定细胞数目;Westernblotting方法测定P27kipI表达。
结果:大剂量IFN-γ刺激OL前体细胞,见OL前体细胞出现明显凋亡。而小剂量IFN-γ刺激OL前体细胞,可见少有细胞凋亡。MTT结果显小剂量IFN-γ引起OL前体活细胞数目明显增多(0.893±0.25),而大剂量IFN-γ刺激后OL前体活细胞数目明显减少(0.353±0.09),两者在统计学上有显著性差异(P<0.01)。小剂量IFN-γ导致OL前体细胞占总OL细胞数明显增高,而由OL前体细胞分化过来的未成熟OL细胞数明显减少,48h和72h两组在统计学上有显著性差异(P<0.01):Westemblotting方法结果显示小剂量IFN-γ刺激OL前体细胞,随着时间延长,P27kipI蛋白表达逐渐下调,48h和72h两组在统计学上有显著性差异(P<0.01)。
结论:大剂量IFN-γ引起OL前体细胞凋亡,而小剂量IFN-γ并不直接引起OL前体细胞凋亡,而是抑制OL前体细胞的分化成熟,并且可能通过某种信号通路影响P27kipl,使其表达下调,最终影响OL前体细胞分化。