【摘 要】
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目的 建立并优化Kinectin实时逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)体系,检测人肝癌、癌旁和正常肝组织Kinectin mRNA表达,探讨Kinectin与肝癌相关性.方法 通过正常肝组织cDNA分
【机 构】
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广西医科大学组织学与胚胎学教研室,南宁 530021
【出 处】
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中华医学会医学细胞生物学分会第三届全国学术会议
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目的 建立并优化Kinectin实时逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)体系,检测人肝癌、癌旁和正常肝组织Kinectin mRNA表达,探讨Kinectin与肝癌相关性.方法 通过正常肝组织cDNA分别进行Kinectin和内参Hprt1 PCR扩增,产物纯化后与pMD19-T Simple Vector连接,转化DH5α感受态细菌,通过蓝白斑筛选阳性单克隆.挑取阳性单克隆接种培养,提取质粒通过电泳、PCR、酶切和测序鉴定.检测重组质粒浓度并倍比稀释制作Kinectin和Hprt1标准品.优化实时PCR退火温度和Mg2+浓度.对44例肝癌、癌旁组织和9例正常肝组织cDNA进行Kinectin和Hprt1实时PCR检测.结果 质粒重组成功,实时PCR体系适宜退火温度和Mg2+浓度分别为59℃和2.5 mmol/L.肝癌、癌旁和正常肝组织Kinectin mRNA相对表达量(Kinectin/Hprt1)分别为(0.525±0.630)、(0.569±0.686)、(0.395±0.176),差异无统计学意义(P＞ 0.05).结论建立了Kinectin实时荧光定量RT-PCR体系,为研究Kinectin在胚胎发育中的表达及意义打下基础.肝癌和癌旁组织Kinectin表达水平比正常肝组织高,Kinectin与肝癌相关性有待进一步研究.
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