【摘 要】
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本研究旨在构建IGF-1转基因绵羊,并对其进行分子生物学评价(转基因阳性鉴定),进一步为转基因羊的生物安全性评价提供一定的科学依据.文章利用RT-PCR方法获得了绵羊IGF-1
【机 构】
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新疆农垦科学院畜牧鲁医研究所/新疆兵团绵羊繁育生物技术重点实验室,石河子,832000
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本研究旨在构建IGF-1转基因绵羊,并对其进行分子生物学评价(转基因阳性鉴定),进一步为转基因羊的生物安全性评价提供一定的科学依据.文章利用RT-PCR方法获得了绵羊IGF-1全长cDNA序列,其与KAP6.1基因(完整的CDS区及部分5'端序列)以及红色荧光蛋白表达原件连接构成IGF-1毛囊特异性表达载体pDsRed-IGF-1,通过细胞转染、体细胞核移植、胚胎移植技术获得了30只转IGF-1基因绵羊;分别采集30只转基因绵羊与野生型绵羊个体外周血液样本,选择IGF-1特异性引物(选择在目的基因和启动子序列间)利用RT-PCR技术对获得的转基因个体的阳性与否进行鉴定.结果表明,所检测的30份转基因绵羊个体均在545bp处产生特异性条带,而非转基因绵羊阴性对照个体在545bp处均未有条带出现,通过切胶、回收、测序以及生物信息学分析,待测片段与目的片段的同源性高达100%,初步表明30只转基因绵羊为转基因阳性.以上结果为深入研究IGF-1对绵羊毛性状的影响提供了动物载体,同时也为转基因改良绵羊的安全性评价积累了基础数据.
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