【摘 要】
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目的 利用RNAi技术干扰耐药乳腺癌细胞MCF-7/MX 100的ABCG2基因的表达.方法 设计并化学合成3条不同的siRNA,设立阴性、阳性对照组及siRNA干扰组进行实验.Real-time RT-PCR检测不同组的BCRP的mRNA水平,Western-blot检测BCRP蛋白的水平,流式细胞术法分析BCRP功能的变化.确定干扰效果好的组别,将其连入pTRIPZ慢病毒表达质粒,得到的病毒感
【机 构】
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浙江大学药物分析和药物代谢实验室,浙江 杭州 310058
【出 处】
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第十届全国药物和化学异物代谢学术会议暨第三届国际ISSX/CSSX联合学术会议
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目的 利用RNAi技术干扰耐药乳腺癌细胞MCF-7/MX 100的ABCG2基因的表达.方法 设计并化学合成3条不同的siRNA,设立阴性、阳性对照组及siRNA干扰组进行实验.Real-time RT-PCR检测不同组的BCRP的mRNA水平,Western-blot检测BCRP蛋白的水平,流式细胞术法分析BCRP功能的变化.确定干扰效果好的组别,将其连入pTRIPZ慢病毒表达质粒,得到的病毒感染MCF-7/MX100细胞,并用同法鉴定干扰病毒的作用.结果 siRNA干扰实验中,RT-PCR和Western-blot检测结果显示：BCRP2和BCRP3组干扰效果明显,mRNA抑制率分别为97％和95％,蛋白的表达抑制率分别为76％和65％.流式结果显示：BCRP2和BCRP3组对米托葸醌的敏感性明显提高,与对照组差异有显著性(P＜0.05).慢病毒干扰实验中,BCRP2和BCRP3组的mRNA抵制率分别为37.9％和53.1％,蛋白的表达抵制率分别为69％和47％,BCRP2的药物敏感性也显著增加(P＜0.05).结论 本实验设计的siRNA和慢病毒能抵制BCRP基因转录和翻译水平的表达,其中以BCRP2的干扰效果明显,能明显提高MCF-7/MX100对米托蒽醌的药物敏感性.
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