【摘 要】
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目的 探讨MAP4K4基因在CD4+T淋巴细胞中的功能.方法 应用MTT法检测正常型C57小鼠和特异CD4+T淋巴细胞MAP4K4基因缺陷型C57小鼠外周淋巴结中CD4+T淋巴细胞在给予佛波酯(PMA)和离子霉素刺激72 h后的细胞增殖功能.同时将刺激72 h后的CD4+T淋巴细胞染Annexin Ⅴ-FITC和PI-PE抗体,利用流式细胞仪检测两种小鼠外周淋巴结中凋亡的CD4+T淋巴细胞所占百分
【机 构】
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北京大学医学部公共卫生学院毒理系 食品安全毒理学研究与评价北京市重点实验室,北京100191
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目的 探讨MAP4K4基因在CD4+T淋巴细胞中的功能.方法 应用MTT法检测正常型C57小鼠和特异CD4+T淋巴细胞MAP4K4基因缺陷型C57小鼠外周淋巴结中CD4+T淋巴细胞在给予佛波酯(PMA)和离子霉素刺激72 h后的细胞增殖功能.同时将刺激72 h后的CD4+T淋巴细胞染Annexin Ⅴ-FITC和PI-PE抗体,利用流式细胞仪检测两种小鼠外周淋巴结中凋亡的CD4+T淋巴细胞所占百分比.用荧光定量PCR法检测两种C57小鼠外周淋巴结中CD4+T淋巴细胞给予PMA/离子霉素刺激72 h后IL-2和IFN-γ的相对表达量.用流式细胞仪检测两种C57小鼠外周淋巴结中CD4+T淋巴细胞给予PMA/离子霉素刺激6h后,IL-4,IL-17,IFN-γ和Foxp3细胞因子及转录因子的表达水平.用Western blot法检测两种小鼠CD4+T淋巴细胞ERK,JNK和p38蛋白磷酸化表达水平.结果 用PMA/离子霉素刺激72 h后,MAP4K4基因敲除后可以抑制CD4+T淋巴细胞的增殖,对照组和MAP4K4基因敲除组凋亡的CD4+T淋巴细胞百分比无统计学差异并且MAP4K4基因敲除后可以显著降低IL-2和IFN-γ mRNA的相对表达量.用PMA/离子霉素刺激6h后,MAP4K4基因敲除后增加了Foxp3转录因子的表达,同时降低IFN-γ细胞因子的表达水平,但是MAP4K4基因敲除并不影响IL-17和IL-4细胞因子的表达.MAP4K4基因敲除显著抑制CD4+T淋巴细胞磷酸化ERK,JNK和p38蛋白的表达.结论 MAP4K4基因在CD4+T淋巴细胞中具有重要的作用,它可以促进转录因子Foxp3的表达,同时抑制IL-2和IFN-γ细胞因子的表达.MAP4K4基因对CD4+T淋巴细胞的增殖具有不可或缺的作用,其潜在的作用机制可能与抑制ERK,JNK和p38蛋白磷酸化有关.
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