【摘 要】
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为建立准确定量检测病毒性出血性败血症病毒(VHSV)的实时荧光RT—PCR方法,本文在VHSV-N基因保守区设计了Taqman MGB探针与引物对。随后,采用体外转录技术获得了VHSV-N基因RNA,并以此为绝对定量标准品,建立了VHSV的绝对定量检测实时荧光RT-PCR法。并与OIE推荐的普通RI-PCR法进行了比较。本荧光RT-PCR法特异性好,与其他鱼类弹状病毒无交叉反应。检测线性范围为10
【机 构】
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北京出入境检验检疫局 北京 101113 北京市水产技术推广站 北京 100021
【出 处】
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2008年京津冀畜牧兽医科技创新交流会暨新思想、新观点、新方法论坛
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为建立准确定量检测病毒性出血性败血症病毒(VHSV)的实时荧光RT—PCR方法,本文在VHSV-N基因保守区设计了Taqman MGB探针与引物对。随后,采用体外转录技术获得了VHSV-N基因RNA,并以此为绝对定量标准品,建立了VHSV的绝对定量检测实时荧光RT-PCR法。并与OIE推荐的普通RI-PCR法进行了比较。本荧光RT-PCR法特异性好,与其他鱼类弹状病毒无交叉反应。检测线性范围为1010-102拷贝/反应,灵法度达102拷贝/反应。此检测灵敏度比OIE推举的RT-PCR法高出5个数量级,比嵌套RT-PCR高出1个数量级。本法是出入境检疫VHSV的有效方法。
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