戊型肝炎病毒荧光定量RT-PCR快速检测技术的建立和初步应用

来源 :2008年京津冀畜牧兽医科技创新交流会暨新思想、新观点、新方法论坛 | 被引量 : 0次 | 上传用户:qq3248893
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利用DNAMAN软件对GenBank登录的戊型肝炎病毒四个主要基因型代表株的序列进行分析,选择其高度保守的ORF3区域设计合成引物和探针,并扩增约0.3kb核苷酸片段进行体外转录制备标准品cRNA,对荧光定量PCR的反应条件进行了优化,建立了适用于戊型肝炎病毒主要基因型检测的通用荧光定量RT-PCR检测方法。利用该检测方法可检测Ⅰ型和Ⅳ型戊型肝炎的阳性病料,同时与常规巢式RT-PCR方法比较表明,所建立的TaqMan荧光定量RT-PCR灵敏度可达2.0×101拷贝/反应,比巢式RT-PCR方法灵敏度高10-100倍以上。在对54份临床样品的检测中,进一步证实了该方法快速、灵敏且重复性好,可满足戊型肝炎病毒早期快速诊断的需要。
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