【摘 要】
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目的 葡萄籽原花青素(Grape-seed proanthocyanidins,GSPs)具有抗氧化和抗炎作用,本实验主要观察其对炎症因子产生的影响及相关信号通路的改变. 方法 体外培养RAW264.7巨噬细胞,加入不同浓度的GSPs作用24小时或者48小时后给予脂多糖(LPS)刺激.用Real-time PCR方法检测细胞因子IL-1β、TNF-α、IL-10和COX-2的mRNA表达水平,用E
【机 构】
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北京大学公共卫生学院毒理学系,食品安全毒理学研究与评价北京市重点实验室,北京100191
【出 处】
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2016(第二届)毒性测试替代方法与转化毒理学(国际)学术研讨会暨有害结局路径(AOP)与风险评估培训会议
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目的 葡萄籽原花青素(Grape-seed proanthocyanidins,GSPs)具有抗氧化和抗炎作用,本实验主要观察其对炎症因子产生的影响及相关信号通路的改变. 方法 体外培养RAW264.7巨噬细胞,加入不同浓度的GSPs作用24小时或者48小时后给予脂多糖(LPS)刺激.用Real-time PCR方法检测细胞因子IL-1β、TNF-α、IL-10和COX-2的mRNA表达水平,用ELISA的方法检测培养液上清中各种细胞因子的分泌水平,用Griess试剂法测定NO含量,用Western blot的方法检测GSPs作用24h、LPS刺激1h后对MAPK和NF-κB信号通路分子的影响.结果 与LPS组比较,50μg/ml和100μμg/ml的GSPs能显著降低TNF-α,COX-2 mRNA的表达(P＜o.05),100μg/ml能显著降低IL-1βmRNA的表达；相反,50μg/ml和100μg/ml的GSPs却能显著促进IL-10 mRNA的表达(P＜0.05).GSPs在蛋白水平会抑制炎症因子IL-1β、TNF-α、IL-6的分泌,同时会促进抗炎因子IL-10的分泌.50μg/ml和100μg/ml的GSPs作用于细胞48h对LPS诱导的RAW264.7细胞分泌NO有抑制作用.Western blot结果显示各浓度GSPs作用RAW264.7细胞24h均可抑制MAPK信号通路分子ERK、JNK、P38的磷酸化,并抑制NF-κB信号通路分子IKKα/β的磷酸化,IκB的降解以及NF-κB的核转位. 结论 GSPs可能通过调控MAPK和NF-κB信号传导通路而抑制细胞因子IL-1β、TNF-α、COX-2及炎性介质NO等的分泌,促进抗炎因子IL-10的分泌,从而发挥其抗炎作用.
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