【摘 要】
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目的 雷公藤甲素(triptolide),又称雷公藤内酯醇、雷公藤内酯,是从卫矛科植物雷公藤中分离得到的二萜内酯化合物,是雷公藤的主要有效成分之一.雷公藤甲素作为传统中草药成份,临床上常用于治疗关节炎、自身免疫性紊乱、肿瘤、器官移植、肾病、哮喘等疾病的治疗.近年来,雷公藤甲素的肝脏、肾、心脏和生殖系统等多脏器毒性引起了人们的广泛关注.本课题是采用本实验室建立的高内涵细胞表型分析系统在细胞水平筛查雷
【机 构】
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军事医学科学院毒物药物研究所;抗毒药物和毒理学国家重点实验室,北京,100850,中国 军事医学科
【出 处】
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2016(第二届)毒性测试替代方法与转化毒理学(国际)学术研讨会暨有害结局路径(AOP)与风险评估培训会议
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目的 雷公藤甲素(triptolide),又称雷公藤内酯醇、雷公藤内酯,是从卫矛科植物雷公藤中分离得到的二萜内酯化合物,是雷公藤的主要有效成分之一.雷公藤甲素作为传统中草药成份,临床上常用于治疗关节炎、自身免疫性紊乱、肿瘤、器官移植、肾病、哮喘等疾病的治疗.近年来,雷公藤甲素的肝脏、肾、心脏和生殖系统等多脏器毒性引起了人们的广泛关注.本课题是采用本实验室建立的高内涵细胞表型分析系统在细胞水平筛查雷公藤甲素的肝细胞毒性特征,为快速揭示雷公藤甲素的分子机制提供实验依据.方法 采用高内涵细胞分析技术,定量、动态分析了雷公藤甲素对HepG2细胞的形态、结构、氧化应激、DNA损伤、溶酶体变化、细胞周期和细胞死亡方式等多参数的影响,以及在基因修饰的报告蛋白细胞系上对氧化应激(Nrf-2)、内质网应激(ATF6)、缺氧应激(Hifla)、炎性反应(NfκB)、核受体(AR、ER、GR)以及p53/p27泛素化等通路的影响.结果 雷公藤甲素处理HepG2细胞24小时,剂量依赖地诱导细胞死亡,IC50约为145.1±7.5nM.在最低细胞毒浓度下伴有细胞核、溶酶体增大,自噬颗粒体的形成,并在细胞毒性浓度下,PH2AX显著升高、线粒体膜电位和核膜通透性增加,同时,ROS、GSH、MnSOD有不同程度的改变.时效测试表明,除3和6小时细胞一过性谷胱甘肽下降10-20％,溶酶体增加外,其它参数未发生改变；应激通路的筛查显示,在无毒浓度下拮抗缺氧信号通路,毒性起始浓度下抑制缺氧信号通路,但在无毒剂量下未观察到ATF6、Nrf-2、NfκB的显著变化；信号通路筛查发现从0.1nM起浓度依赖地时拮抗蛋白酶抑制剂抑制的p53/p27信号通路,GR受体通路激活增加能够增加雷公藤甲素的细胞毒性.结论 雷公藤甲素存在复杂的毒性机制,而泛素化激活、溶酶体应激、GSH降低可能是雷公藤甲素诱发肝细胞毒性的主要机制.
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