【摘 要】
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目的 建立RNA恒温扩增联合熔解曲线分析技术(RIARD-MCA)鉴定胞内分枝杆菌的方法,评估RIARD-MCA快速鉴定分枝杆菌临床分离株中胞内分枝杆菌的灵敏度和特异度.方法 以胞内
【机 构】
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同济大学附属上海市肺科医院/上海市结核病(肺)重点实验室
【出 处】
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中华医学会结核病分会2013年学术大会
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目的 建立RNA恒温扩增联合熔解曲线分析技术(RIARD-MCA)鉴定胞内分枝杆菌的方法,评估RIARD-MCA快速鉴定分枝杆菌临床分离株中胞内分枝杆菌的灵敏度和特异度.方法 以胞内分枝杆菌的16S rRNA的特异序列为检测靶标设计RNA探针和带有T7启动子的逆转录扩增引物,42℃恒温扩增实时检测及熔解曲线分析,鉴定胞内分枝杆菌.将胞内分枝杆菌倍比稀释分析RIARD-MCA鉴定胞内分枝杆菌的灵敏度；对21种分枝杆菌标准株,5种呼吸道常见非分枝杆菌检测分析RIARD-MCA鉴定胞内分枝杆菌的特异度；用RIARD-MCA法和16S rRNA测序法同步对229株分枝杆菌临床分离株进行鉴定,以16S rRNA测序法为参考方法,分析RIARD-MCA鉴定胞内分枝杆菌临床分离株的灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值及kappa值.结果 RIARD-MCA可准确特异的鉴定出21种分枝杆菌标准株及5种呼吸道常见非分枝杆菌中的胞内分枝杆菌,其灵敏度可达4 CFU/反应；在229株分枝杆菌临床分离株(63株胞内分枝杆菌,60株龟/脓肿分枝杆菌,49株MTB,13株金色分枝杆菌,7株鸟分枝杆菌,7株戈登分枝杆菌,5株偶发分枝杆菌,5株海/溃疡分枝杆菌,2株副瘰疬分枝杆菌,3株M marseillense,3株堪萨斯/胃分枝杆菌,2株Mcolombiense,l株瘰疬分枝杆菌,9株其他非结核分枝杆菌)鉴定中,RIARD-MCA鉴定胞内分枝杆菌的灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值及kappa值分别为100％、100％、100％、100％及1.结论 本研究结果显示RIARD-MCA鉴定胞内分枝杆菌具有较高的特异度和特异度,且使用常规荧光定量PCR仪即可进行检测,检测时间仅约3h,具有快速准确的优势,可以作为一种新型快速、准确的胞内分枝杆菌分子鉴定方法,经过进一步研究优化有望用于临床标本的直接胞内分枝杆菌菌种鉴定.
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