胸膜肺炎放线杆菌血清型特异的疫苗候选基因筛选与短小棒状杆菌异源免疫

• 作 者: 雷连成;李耿;王丽哲;孙长江;吕爽;蔡林君;冯新;韩文瑜;
• 机 构: 吉林大学畜牧兽医学院重要病原及疫病研究室
• 出 处: 2007年中国畜牧兽医学会生物制品学分会中国微生物学会兽医微生物学专业委员会学术研讨会
• 发表日期: 2007年期

猪胸膜肺炎放线杆菌(APP)是猪传染性胸膜肺炎的病原,引起猪的一种高度接触传染性、致死性呼吸道传染病。已发现APP有15个血清型,各血清型之间缺少有效的交叉免疫保护,给本病的疫苗研究带来了困难。本研究提取血清1型与5型APP菌株mRNA,采用cDNA代表性差异分析法(cDNA RDA),获得APP 1型和5型的特异性差异表达基因,克隆入PGEM-T载体,建立APP 1型与5型差减文库,将这些文库基因在大肠杆菌核糖体展示系统进行展示,并应用免疫筛选技术和RT-PCR技术筛选疫苗候选基因,克隆、测序,获得血清1型APP 6条免疫应答相关基因,在GenBank+EMBL+DDBJ+PDB序列序检索,发现2条为未知基因,2条与短小棒状杆菌(CP)同源性最高。获得APP血清5型14条免疫应答相关基因,在GenBank+EMBL+DDBJ+PDB序列库检索,5条为未知基因,6条与短小棒状杆菌同源性为95％以上。以CP为抗原对1型APP、5型APP抗血清进行ELISA检测,均可产生强的交叉免疫反应,用CP制成的全菌制剂免疫小鼠,产生的抗血清可与1型APP、5型APP发生强的免疫反应,脾淋巴细胞检测结果显示,免疫组CD3平均43.33％,CD4平均29.77％,CD8平均6.5％。对照CD3平均23.35％,CD4平均13.65％,CD8平均4.0％。以10倍LD501型APP感染CP免疫小鼠,小鼠存活率为95％,以10倍LD505型APP感染CP免疫小鼠,小鼠存活率为90％,并且在攻毒后第15天体内APP可全部被清除。表明短小棒状杆菌与APP存在共同抗原,能够产生交叉免疫应答,可以预防APP感染。