【摘 要】
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(引言)旨在确定Dazl 基因启动子的核心活性调控区,并比较不同诱导剂对Dazl 基因启动子活性的影响,筛选出最佳基因诱导剂,以提高胚胎干细胞(ESCs)向精原干细胞(SSCs)的分化效率.(材料与方法)采用PCR 法扩增不同长度的Dazl 启动子,插入到pEGFP-N1 和/或pGL3-basic 载体,构建重组载体.将重组载体转染GC-1 细胞系,检测双荧光素酶活性以确定Dazl 启动子核心活
【机 构】
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扬州大学动物科学与技术学院江苏省动物繁育与分子设计重点实验室,扬州225009
【出 处】
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中国畜牧兽医学会家禽学分会第十七次全国家禽学术研讨会
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(引言)旨在确定Dazl 基因启动子的核心活性调控区,并比较不同诱导剂对Dazl 基因启动子活性的影响,筛选出最佳基因诱导剂,以提高胚胎干细胞(ESCs)向精原干细胞(SSCs)的分化效率.(材料与方法)采用PCR 法扩增不同长度的Dazl 启动子,插入到pEGFP-N1 和/或pGL3-basic 载体,构建重组载体.将重组载体转染GC-1 细胞系,检测双荧光素酶活性以确定Dazl 启动子核心活性区域；比较添加不同诱导剂(维甲酸(RA)、全反式维甲酸(ATRA)、他米巴罗汀(Am80)、骨形成蛋白4(BMP4)、卵泡刺激素(FSH)、雌激素(E2)、睾酮和睾丸提取液)对Dazl 启动子活性的影响,筛选最佳诱导剂；通过形态学,qRT-PCR和免疫细胞化学检测法比较诱导剂添加后,对鸡ESCs 向精原干细胞分化的效果.(结果)确定苏禽黄鸡Dazl 基因的启动子核心调控区域为-383～- 186 bp.双荧光素酶报告基因检测系统检测结果表明,与对照组相比,诱导剂ATRA 和E2 分别使Dazl 基因启动子活性提高至1.06 和1.08,差异显著(P＜0.05＝；诱导剂Am80 使Dazl 基因启动子活性提高至1.32,差异极显著(P＜0.01＝；而其他诱导剂与对照组相比无显著性差异(P＞0.05).体外诱导实验证明,经ATRA 诱导后的第6d Dazl 表达量达到最高,随后呈缓慢下降趋势；Am80 诱导后Dazl 的持续表达,且在10d 达到最大值；E2 诱导至后第8d Dazl 表达量显著上升；ATRA,Am80 和E2诱导后的第10d 均观察到生殖样细胞生成.(讨论)体外诱导条件下诱导剂ATRA、Am80 和E2 均可提高鸡Dazl 基因的表达量,促进ESCs 向生殖样细胞分化.本研究将为通过Dazl 基因的表达而诱导鸡ESCs 向精原干细胞分化奠定基础.
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