【摘 要】
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目的 制备基于SFV复制子的弓形虫三磷酸核苷水解酶(NTPase-Ⅱ)的"自杀性"DNA疫苗,研究其免疫原性和免疫保护性.方法 提取弓形虫RH株基因组DNA,PCR扩增弓形虫NTPaseⅡ基因,经XmaⅠ和SpeⅠ双酶切克隆入SFV复制子载体DREP中,以制备抗弓形虫NTPase-Ⅱ"自杀性"DNA疫苗.免疫小鼠后,通过免疫学指标的检测,评价该疫苗诱导的体液免疫应答和细胞免疫应答；用弓形虫RH株和
【机 构】
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温州医科大学寄生虫学教研室,温州325035 温州医科大学寄生虫学教研室,温州325035;温州医
【出 处】
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2015年浙江省医学会热带病与寄生虫病学分会学术会议
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目的 制备基于SFV复制子的弓形虫三磷酸核苷水解酶(NTPase-Ⅱ)的"自杀性"DNA疫苗,研究其免疫原性和免疫保护性.方法 提取弓形虫RH株基因组DNA,PCR扩增弓形虫NTPaseⅡ基因,经XmaⅠ和SpeⅠ双酶切克隆入SFV复制子载体DREP中,以制备抗弓形虫NTPase-Ⅱ"自杀性"DNA疫苗.免疫小鼠后,通过免疫学指标的检测,评价该疫苗诱导的体液免疫应答和细胞免疫应答；用弓形虫RH株和Pru株分别进行急性感染和慢性感染,评价其免疫保护性.结果 以弓形虫基因组DNA为模板,PCR扩增得到长度约为1.8kb的NTPaseⅡ基因,克隆入DREP载体中,成功构建了DREP-NTPaseⅡ重组质粒,大量提取该DREP-NTPaseⅡ质粒制备成"自杀性"DNA疫苗.以5ug/只低剂量免疫BALB/c小鼠,能产生强烈的细胞和体液免疫应答,并且显著延长了免疫组小鼠急性感染的生存时间(P＜0.05),免疫组小鼠脑组织的包囊数也显著下降(P＜0.01).结论 该"自杀性"DNA疫苗具有很强的免疫原性,能产生良好的免疫保护作用,对防治弓形虫病具有良好的应用前景.
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