【摘 要】
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目的 构建基于甲病毒复制子的埃博拉(EBOV) VLPs疫苗并研究其免疫效应.方法 本研究利用甲病毒(Semliki Forest Virus,SFV)复制子载体DREP构建了含EBOV(Zaire型,2014年非洲流行株)的两个主要抗原GP和VP40的重组复制子载体：DREP-GP和DREP-VP40；将该重组载体单独或共同转染293细胞,通过WB和IFA检测GP和VP40蛋白的表达,并通过电镜
【机 构】
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温州医科大学寄生虫学教研室,温州325035;温州医科大学热带医学研究所,温州325035 温州医
【出 处】
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2015年浙江省医学会热带病与寄生虫病学分会学术会议
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目的 构建基于甲病毒复制子的埃博拉(EBOV) VLPs疫苗并研究其免疫效应.方法 本研究利用甲病毒(Semliki Forest Virus,SFV)复制子载体DREP构建了含EBOV(Zaire型,2014年非洲流行株)的两个主要抗原GP和VP40的重组复制子载体：DREP-GP和DREP-VP40；将该重组载体单独或共同转染293细胞,通过WB和IFA检测GP和VP40蛋白的表达,并通过电镜检测病毒样颗粒(VLPs)的组装；将DREP-GP和DREP-VP40以20ug/只的剂量单独或共同免疫BALB/C鼠,通过ELISA检测其体内抗GP和抗VP40抗体的水平；通过ELISA和ELISPOT检测细胞因子的分泌水平.结果 证实DREP-GP和DREP-VP40单独或者共同转染后均能成功表达GP和VP40蛋白,且通过电镜检测到了EBOV VLPs.加强免疫小鼠后均能诱导高滴度的特异性抗体,第3次免疫后单独免疫组的抗GP和抗VP40的抗体滴度分别达到1∶5,120和1∶200,000,且共同免疫组诱导的抗体滴度与单独免疫组类似,说明这两种重组载体之间不存在相互干扰,且高水平的抗体可以至少保持2个月.通过检测IgG抗体分型,发现其均能诱导高水平的IgG1,IgG2a和IgG2b的产生.进一步检测分泌的细胞因子,发现GP和VP40共同免疫组比单独免疫组均能诱导高水平的IL4,IL10和IFN-r的产生,说明共同免疫组更能有效刺激CD8+T细胞的产生.结论 本研究成功构建了可表达形成VLPs的EBOV复制子疫苗DREP-GP和DREP-VP40,并证实GP和VP40的共同免疫能诱导产生高水平的特异性抗体,且更能有效刺激CD8+T细胞的产生,可作为EBOV疫苗的候选.
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