【摘 要】
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目的 证实白纹伊蚊体内存在与果蝇和库蚊同源的"类IFN"因子Vago,白纹伊蚊Vago与登革病毒感染相关.方法 生物信息学分析白纹伊蚊唾液腺转录组,预测与果蝇和致倦库蚊Vago蛋白同源的白纹伊蚊Vago.RT-PCR验证白纹伊蚊Vago在各个发育阶段(卵、幼虫、蛹和雌、雄成蚊)、不同组织(雌蚊的唾液腺和中肠组织)和白纹伊蚊C6/36细胞内的表达.PCR扩增Vago成熟肽基因,构建重组表达载体pCo
【机 构】
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温州医科大学寄生虫学教研室,温州325035;温州医科大学热带医学研究所,温州325035 温州医
【出 处】
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2015年浙江省医学会热带病与寄生虫病学分会学术会议
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目的 证实白纹伊蚊体内存在与果蝇和库蚊同源的"类IFN"因子Vago,白纹伊蚊Vago与登革病毒感染相关.方法 生物信息学分析白纹伊蚊唾液腺转录组,预测与果蝇和致倦库蚊Vago蛋白同源的白纹伊蚊Vago.RT-PCR验证白纹伊蚊Vago在各个发育阶段(卵、幼虫、蛹和雌、雄成蚊)、不同组织(雌蚊的唾液腺和中肠组织)和白纹伊蚊C6/36细胞内的表达.PCR扩增Vago成熟肽基因,构建重组表达载体pCold Ⅲ-Vago,表达产物经SDS-PAGE及Western blot鉴定后,利用镍离子亲和树脂纯化Vago蛋白,以纯化产物为抗原免疫BALB/C小鼠制备抗Vago的多克隆抗体.登革病毒(DENV2)感染C6/36细胞,分别在0h,12h,24h和48h收集C6/36细胞,RT-qPCR检测Vago基因的表达,以制备的鼠抗Vago多克隆抗体为一抗Western blot检测Vago蛋白的表达.纯化的重组Vago预处理C6/36细胞后进行DENV2感染实验,RT-qPCR检测细胞内DENV NS1基因.结果 生物信息学分析发现白纹伊蚊唾液腺转录组中有一个与致倦库蚊和果蝇的Vago同源且富含半胱氨酸和具有8个半胱氨酸组成的VWC保守结构域的蛋白,信号肽分析显示其是一个分泌蛋白,因此将该蛋白命名为白纹伊蚊Vago.RT-PCR验证表明白纹伊蚊Vago在白纹伊蚊各个发育阶段、不同组织和C6/36细胞中均表达.RT-qPCR和Western blot结果表明DENV2感染C6/36细胞12h后,Vago表达显著上升,且随着感染时间的延长,其表达也进一步升高,而紫外灭活DENV2、酵母和大肠杆菌处理细胞48h后并没有诱导Vago表达变化.重组Vago预处理的C6/36细胞内DENV NS1的表达水平明显下降(p＜0.05),但不同浓度重组Vago(100ng/mL和200ng/mL)处理组之间NS1的表达水平无显著差异(p=0.20).结论 本研究证实白纹伊蚊体内表达Vago蛋白,白纹伊蚊Vago与白纹伊蚊抗登革病毒感染相关.
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