目的 研究乙醇引起肝窦内皮细胞(SEC)死亡的类型和血管内皮生长因子(VEGF)对这种死亡的作用,以及涉及Ets-1和半胱氨酸蛋白水解酶(Caspase)-8的作用机制.方法 按照Braet等的方法 并作改进,从Wistar雄性大鼠分离和培养SEC.然后,将SEC与乙醇(25～100 mmol/L)和VEGF(20～30 ng/ml)共同孵育6 h,采用缺口末端标记(TUNEL)技术检测SEC凋亡.以Western印迹法测定Ets-1蛋白表达和FLICE/Caspase-8比色蛋白酶检测试剂盒测定Caspase-8活性的变化.结果 相差显微镜下,培养3 d的SEC呈纺锤状并基本融合.而与乙醇孵育的过程中SEC趋于皱缩和死亡.荧光显微镜下,对照SEC绝大多数呈TUNEL染色阴性;添加乙醇(100 mmol/L)2 h后TUNEL染色阳性细胞开始增加,6 h后约75%细胞呈TUNEL染色阳性;并且,SEC与乙醇(25～100 mmol/L)共同孵育6 h,TUNEL染色阳性的SEC增加呈明显剂量依赖性关系(均P＜0.05).VEGF(20～30 ng/ml)明显抑制100 mmol/L的乙醇引起SEC凋亡,呈明显剂量依赖性关系(P＜0.05);加入VEGF(30 ng/ml)以后引起的TUNEL染色阳性细胞数只是单纯与乙醇孵育的71%(P＜0.05).加入100 mmol/L乙醇培养6 h后,SEC的Ets-1蛋白表达明显减少,VEGF(30 ng/ml)防止乙醇(100 mmol/L)引起SEC表达Ets-1蛋白减少.SEC与乙醇(100 mmol/L)孵育2 h时Caspase-8活性明显增加至44.9±14.3;VEGF(20和30 ng/ml)防止乙醇(100 mmol/L)引起SEC表达Gaspase-8活性增加(分别为30.4±2.0和25.2±2.2,均P＜0.05).结论 VEGF防止乙醇诱导的SEC凋亡,至少部分可能是通过抑制乙醇下调SEC表达Ets-1蛋白和乙醇上调Caspase-8活性表达。
血管内皮生长因子对乙醇诱发大鼠肝窦内皮细胞凋亡的作用
【摘 要】
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目的 研究乙醇引起肝窦内皮细胞(SEC)死亡的类型和血管内皮生长因子(VEGF)对这种死亡的作用,以及涉及Ets-1和半胱氨酸蛋白水解酶(Caspase)-8的作用机制.方法 按照Braet等的方法 并作改进,从Wistar雄性大鼠分离和培养SEC.然后,将SEC与乙醇(25～100 mmol/L)和VEGF(20～30 ng/ml)共同孵育6 h,采用缺口末端标记(TUNEL)技术检测SEC凋亡
【机 构】
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100730,北京医院消化内科,100730,北京医院消化内科,100730,北京医院消化内科,100730,北京医院消化内科,100730,北京医院消化内科
【出 处】
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中华医学杂志
【发表日期】
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2007年87期
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