套式实时荧光定量PCR检测人外周血单个核细胞中FOXP3mRNA

• 作 者: 曹新国 王礼文
• 机 构: 江苏省中医院
• 出 处: 临床检验杂志
• 发表日期: 2006年4期
• 关键词: FOXP3 nested—real—time—PCR 基因表达 FOXP3 nested-real-time PCR gene expression

目的建立检测人外周血单个核细胞（PBMC）中FOXP3mRNA的方法。方法跨内含子设计外引物，并根据扩增的片段。设计一对内引物和TaqMan探针，采用套式实时荧光定量PCR（nested—real—time—PCR）方法。首次PCR扩增用减少引物浓度及循环次数的方法以增加其模板的特异性，再行第二次PCR扩增作实时荧光定量检测，用FOXP3和B—actin标准品作标准曲线，以二者比值作为FOXP3mRNA表达水平指标。结果重复6次PCR，6次试验ct的总平均值为14．66，平均变异系数为5．81％。Ct值和