【摘 要】
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目的 探讨下丘脑室旁核内微小RNA 7a-5p(miR-7a-5p)在自发性高血压大鼠(SHR)交感神经兴奋亢进中的作用及机制.方法 取12周龄正常血压大鼠(WKY)和SHR各24只,分别随机分为4组,每组6只:室旁核注射miR-7a-5p-空载病毒(Null)组、过表达miR-7a-5p基因重组腺相关病毒(rAAV)+敲减miR-7a-5p基因rAAV阴性对照(miR-7a-5p+ NC antimiR-7a-5p)组、过表达miR-7a-5p基因rAAV+敲减miR-7a-5p基因rAAV(miR-7
【机 构】
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吉林师范大学生命科学学院,吉林四平136000;吉林师范大学生命科学学院,吉林四平136000;吉林师范大学植物资源科学与绿色生产吉林省重点实验室,吉林四平136000
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目的 探讨下丘脑室旁核内微小RNA 7a-5p(miR-7a-5p)在自发性高血压大鼠(SHR)交感神经兴奋亢进中的作用及机制.方法 取12周龄正常血压大鼠(WKY)和SHR各24只,分别随机分为4组,每组6只:室旁核注射miR-7a-5p-空载病毒(Null)组、过表达miR-7a-5p基因重组腺相关病毒(rAAV)+敲减miR-7a-5p基因rAAV阴性对照(miR-7a-5p+ NC antimiR-7a-5p)组、过表达miR-7a-5p基因rAAV+敲减miR-7a-5p基因rAAV(miR-7a-5p+antimiR-7a-5p)组、敲减miR-7a-5p基因rAAV+过表达miR-7a-5p基因rAAV阴性对照(antimiR-7a-5p+NC miR-7a-5p)组;另取12周龄WKY大鼠和SHR各24只,分别随机分为4组,每组6只:室旁核注射γ-氨基丁酸A型受体功能性α1亚基(GABRA1)-Null组、过表达GABRA1基因rAAV+敲减GABRA1基因rAAV阴性对照(GABRA1+NC siGABRA1)组、过表达GABRA1基因rAAV+敲减GABRA1基因rAAV (GABRA1+siGABRA1)组和敲减GABRA1基因rAAV+过表达GABRA1基因rAAV阴性对照(siGABRA1+ NC GABRA1)组,4周后观察血流动力学指标、肾交感神经活动(RSNA)和血浆去甲肾上腺素(NE)水平变化;采用免疫荧光检测室旁核内原癌基因AP-1转录因子亚基FosB(FosB)及GABRA1阳性神经元数量;实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测室旁核内miR-7a-5p和GABRA1 mRNA表达水平;免疫印迹法检测室旁核内GABRA1蛋白表达量;分离培养新生Wistar大鼠原代下丘脑神经细胞和传代培养NG108神经细胞系,并转染miR-7a-5p激动剂(agomiR-7a-5p)、抑制剂(antagomiR-7a-5p)或miR-7a-5p激动剂阴性对照(NC agomiR-7a-5p),48 h后检测miR-7a-5p基因表达水平和GABRA1蛋白表达量,TargetScan软件预测和双荧光素酶报告系统检测miR-7a-5p和GABRA1的靶向关系.结果 室旁核注射rAAV 4周后,过表达miR-7a-5p导致WKY和SHR的RSNA增强(均P＜0.05),FosB阳性神经元数量上调,GABRA1阳性神经元数量下调(均P＜0.01).室旁核过表达GABRA1导致WKY和SHR的RSNA减弱(均P＜0.05).与WKY大鼠相比,过表达或敲减miR-7a-5p/GABRA1基因对SHR的RSNA的影响更显著(均P＜0.05).与WKY大鼠相比,SHR室旁核内miR-7a 5p表达上调(2.50±0.20比1.01±0.06,t=7.11,P＜0.01),GABRA1蛋白表达水平下调(0.60±0.06比1.00±0.04,t=5.31,P＜0.01).在原代下丘脑神经细胞或NG108细胞内转染agomiR-7a-5p可导致GABRA1蛋白表达下调.TargetScan预测发现,miR-7a-5p和GABRA1 mRNA的3\'非翻译区(3\'UTR)存在序列结合,双荧光素酶报告基因证实miR-7a-5p靶向调控GABRA1基因.结论 SHR室旁核内上调的miR-7a-5p可通过靶向抑制GABRA1蛋白表达引起交感神经过度兴奋,从而影响高血压的发生发展.
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