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基金项目山东省优秀中青年科学家科研奖励基金资助项目(No.2005BS02003)
摘要目的:研究肾上腺髓质素ADM和肾上腺加压素ADT对肺动脉平滑肌细胞增殖的影响。方法:原代培养大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMC),加入不同浓度的ADM、ADT培养72小时,固定前3小时掺入Brdu(5-溴-2-脱氧尿嘧啶核苷),用免疫荧光染色,观察对培养的PASMC增殖的影响。结果:10-7 ADM对PASMC增殖的抑制作用最强,10-7 ADT对PASMC增殖的促进作用最强。
关键词肾上腺髓质素ADM肾上腺加压素ADTBrdu
doi:10.3969/j.issn.1007-614x.2010.11.007
肺动脉高压是左向右分流先天性心脏病(CHD)常见且严重的并发症,伴有肺动脉高压的先心病患者手术的危险性和死亡率明显增加。肺血管收缩反应增强和肺血管结构重建是肺动脉高压形成过程中主要的病理生理变化。肺血管结构重建以肺动脉平滑肌细胞增殖、肥大和表型转化,无肌型动脉肌型化,胶原等细胞外间质在肺血管壁异常沉积为主要特征,属结构性改变,不可逆,是造成肺动脉高压持续存在并难以治疗的主要原因[1]。本研究旨在探讨肾上腺髓质素对肺动脉平滑肌细胞增殖的影响。
材料与方法
实验材料:①实验动物:体重150～200g健康雄性Wistar大鼠(购自山东大学医学院试验动物中心)。②试剂Adrenomedullin,Adrenotensin,Rabbit Anti-Brdu(北京博奥森),α-actin抗体,DAPI,FITC标记山羊抗兔IgG(北京中杉),DMEM,胎牛血清(Gipco)
讨论
肾上腺髓质素(ADM)是Kitamura等3]于1993年在人嗜铬细胞瘤中发现的一种血管活性多肽,在人类血浆、肾上腺、肺血管等部位发现其存在,证实ADM前体(proADM)由185个氨基酸组成,在体内经内源性肽酶的作用下可以降解产生4个不同的活性肽段,即proADM22-41(PAMP),proADM45-92,proADM95-146(ADM)和proADM153-185 (ADT,肾上腺加压素)[4]。
细胞增殖周期的S期是DNA合成期,此期细胞内DNA进行半保留复制,需要各种合成DNA的原料掺入其中。5-溴-2-脱氧尿苷(5-Bromo-2-deoxyuridine,BrdU)与胸腺嘧啶核苷(TdR)具有相似的结构,该物质能取代胸腺嘧啶掺入S期细胞新合成的DNA链内[5]。因此,可采用Brdu掺入平滑肌细胞,用抗Brdu抗体做免疫荧光染色,进行细胞增殖功能测定。ADM具有扩血管、抑制平滑肌细胞增殖的作用[6]。文献报道ADT可收缩血管、升高血压和促进血管平滑肌细胞增殖[7],与本实验一致,且本实验证实10-7ADM对PASMC增殖抑制作用最强,10-7ADT对PASMC增殖促进作用最强。
参考文献
1Egito ES,Aiello VD,Bosisio IB,et al.Vascular remodeling process in reversibility of pulmonary arterial hypertension secondary to congenital heart disease.Pathol Res Pract,2003,199(8):521-532.
2李锦春,孙卫东,谭勋,等.组织贴块法培养肉鸡肺动脉平滑肌细胞.中国兽医学报,2009,29(3):339-342.
3Kitamura K,Kangawa K,Kawamoto M,et al.Adrenomedullin:a novel hypotensive peptide isolated from human pheochromacytoma.Biochem Biophys Res Commun,1993,192:553-560.
4Upton PD,Wharton J,Coppock H,et al.Adrenomedullin expression and growth inhibitory effects in distinct pulmonary artery smooth muscle cell subpopulations.Am J Respir Cell Mol Biol,2001,24(2):170-178.
5Hong XUE,Ping YUAN,et al.Effect of adrenotensin on cell proliferation is mediated by angiotensin II in cultured rat mesangial cells.Acta Pharmacologica Sinica,2009,30:1132-1137.
6Yoshimoto T,Fukai N,Sato R,et al.Antioxidant effect of adrenomedullin on angiotensin II-induced reactive oxygen species generation in vascular smooth muscle cells.Endocrinology,2004,145(7):3331-3337.
7Matsui H,Shimosawa T,Itakura K,et al.Adrenomedullin can protect against pulmonary vascular remodeling induced by hypoxia.Circulation,2004,109(18):2246-2251.`
摘要目的:研究肾上腺髓质素ADM和肾上腺加压素ADT对肺动脉平滑肌细胞增殖的影响。方法:原代培养大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMC),加入不同浓度的ADM、ADT培养72小时,固定前3小时掺入Brdu(5-溴-2-脱氧尿嘧啶核苷),用免疫荧光染色,观察对培养的PASMC增殖的影响。结果:10-7 ADM对PASMC增殖的抑制作用最强,10-7 ADT对PASMC增殖的促进作用最强。
关键词肾上腺髓质素ADM肾上腺加压素ADTBrdu
doi:10.3969/j.issn.1007-614x.2010.11.007
肺动脉高压是左向右分流先天性心脏病(CHD)常见且严重的并发症,伴有肺动脉高压的先心病患者手术的危险性和死亡率明显增加。肺血管收缩反应增强和肺血管结构重建是肺动脉高压形成过程中主要的病理生理变化。肺血管结构重建以肺动脉平滑肌细胞增殖、肥大和表型转化,无肌型动脉肌型化,胶原等细胞外间质在肺血管壁异常沉积为主要特征,属结构性改变,不可逆,是造成肺动脉高压持续存在并难以治疗的主要原因[1]。本研究旨在探讨肾上腺髓质素对肺动脉平滑肌细胞增殖的影响。
材料与方法
实验材料:①实验动物:体重150～200g健康雄性Wistar大鼠(购自山东大学医学院试验动物中心)。②试剂Adrenomedullin,Adrenotensin,Rabbit Anti-Brdu(北京博奥森),α-actin抗体,DAPI,FITC标记山羊抗兔IgG(北京中杉),DMEM,胎牛血清(Gipco)
讨论
肾上腺髓质素(ADM)是Kitamura等3]于1993年在人嗜铬细胞瘤中发现的一种血管活性多肽,在人类血浆、肾上腺、肺血管等部位发现其存在,证实ADM前体(proADM)由185个氨基酸组成,在体内经内源性肽酶的作用下可以降解产生4个不同的活性肽段,即proADM22-41(PAMP),proADM45-92,proADM95-146(ADM)和proADM153-185 (ADT,肾上腺加压素)[4]。
细胞增殖周期的S期是DNA合成期,此期细胞内DNA进行半保留复制,需要各种合成DNA的原料掺入其中。5-溴-2-脱氧尿苷(5-Bromo-2-deoxyuridine,BrdU)与胸腺嘧啶核苷(TdR)具有相似的结构,该物质能取代胸腺嘧啶掺入S期细胞新合成的DNA链内[5]。因此,可采用Brdu掺入平滑肌细胞,用抗Brdu抗体做免疫荧光染色,进行细胞增殖功能测定。ADM具有扩血管、抑制平滑肌细胞增殖的作用[6]。文献报道ADT可收缩血管、升高血压和促进血管平滑肌细胞增殖[7],与本实验一致,且本实验证实10-7ADM对PASMC增殖抑制作用最强,10-7ADT对PASMC增殖促进作用最强。
参考文献
1Egito ES,Aiello VD,Bosisio IB,et al.Vascular remodeling process in reversibility of pulmonary arterial hypertension secondary to congenital heart disease.Pathol Res Pract,2003,199(8):521-532.
2李锦春,孙卫东,谭勋,等.组织贴块法培养肉鸡肺动脉平滑肌细胞.中国兽医学报,2009,29(3):339-342.
3Kitamura K,Kangawa K,Kawamoto M,et al.Adrenomedullin:a novel hypotensive peptide isolated from human pheochromacytoma.Biochem Biophys Res Commun,1993,192:553-560.
4Upton PD,Wharton J,Coppock H,et al.Adrenomedullin expression and growth inhibitory effects in distinct pulmonary artery smooth muscle cell subpopulations.Am J Respir Cell Mol Biol,2001,24(2):170-178.
5Hong XUE,Ping YUAN,et al.Effect of adrenotensin on cell proliferation is mediated by angiotensin II in cultured rat mesangial cells.Acta Pharmacologica Sinica,2009,30:1132-1137.
6Yoshimoto T,Fukai N,Sato R,et al.Antioxidant effect of adrenomedullin on angiotensin II-induced reactive oxygen species generation in vascular smooth muscle cells.Endocrinology,2004,145(7):3331-3337.
7Matsui H,Shimosawa T,Itakura K,et al.Adrenomedullin can protect against pulmonary vascular remodeling induced by hypoxia.Circulation,2004,109(18):2246-2251.`