【摘 要】
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目的 探讨超滤后蛭龙活血通瘀胶囊成分对U937巨噬细胞焦亡的影响,探讨其抑制细胞焦亡的的机制.方法 利用PMA将U937单核细胞诱导为巨噬细胞,LPS+ATP激活NLRP3炎症小体建立细胞
【机 构】
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西南医科大学附属中医医院,四川泸州646000;澳门科技大学,中国澳门999078
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目的 探讨超滤后蛭龙活血通瘀胶囊成分对U937巨噬细胞焦亡的影响,探讨其抑制细胞焦亡的的机制.方法 利用PMA将U937单核细胞诱导为巨噬细胞,LPS+ATP激活NLRP3炎症小体建立细胞焦亡模型;细胞增殖毒性检测(CCK-8)法筛选超滤后蛭龙活血通瘀胶囊成分对U937巨噬细胞活力值影响最适宜的高、中、低剂量用药浓度;将实验分为对照组(Control)、焦亡诱导组(LPS+ATP)及蛭龙活血通瘀胶囊ZL(3μg/ml,10μg/ml,30μg/ml)用药组,处理U937巨噬细胞24h后,流式细胞术检测各组细胞焦亡率(PI/Caspase-1双染),处理细胞后用蛋白免疫印迹法(Western blot)测定各组细胞裂解物和培养上清液中Gsdmd-N、IL-1β、Caspase-l、ASC、NILRP3蛋白的表达水平.结果 流式细胞检测提示,与对照组比较,经过ZL(3μg/ml,10μg/ml,30μg/ml)治疗U937巨噬细胞细胞焦亡模型后,焦亡率下降,差异有显著性(P＜0.05,P ＜0.01,P ＜0.01);免疫印迹实验提示,与对照组相比,焦亡诱导组Gsdmd-N、IL-1β、Caspase-1、ASC、N1LRP3表达水平上升,差异有显著性(P ＜0.01);经过ZL(3μg/ml,10μg/ml,30μg/ml)治疗后,Gsdmd-N、Caspase-1、ASC 和N1LRP3表达水平下降,差异有显著性(P ＜0.05,P＜0.01,P ＜0.01);经过ZL(3μg/m1,10μg/ml,30μg/ml)治疗后,IL-1β表达水平下降,差异有显著性(P＜0.01,P＜0.01,P＜0.01).结论 蛭龙活血通瘀胶囊能够抑制NLRP3炎症小体的活化起到抗细胞焦亡的作用,从而发挥保护细胞作用,其机制可能是通过抑制衔接蛋白ASC与pro-Caspase-1的结合、抑制Caspase-1对Gsdmd和pro-IL-1β的剪切作用及Gsdmd-N和IL-1β蛋白表达有关.
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