香港巨牡蛎ISSR-PCR反应体系的建立及优化

• 作 者: 黎小正 童桂香 韦信贤 吴祥庆 陈康
• 机 构: 广西渔业病害防治环境监测和质量检验中心,钦州市钦南区水产畜牧局
• 出 处: 海洋科学
• 发表日期: 2011年8期
• 关键词: 香港巨牡蛎(Crassostrea hongkongensis) ISSR—PCR 体系优化 Crassogtrea hongkongensis ISSR-P

以香港巨牡蛎（Crassostreahongkongensis）基因组DNA为模板，采用正交设计及单因素比较试验，分别对Mg^2＋、dNTPs、引物、TaqDNA聚合酶和DNA模板浓度的PCR原料进行优化，并通过温度梯度PCR，筛选适宜的退火温度。确立了香港巨牡蛎的最适ISSR—PCR反应体系：25μL反应体系中含PCR1xBuffer，2．5mmol／LM^2＋、0．2mmol／LdNTPs、0．2μmol／L引物、1．2UTaqDNA聚合酶、20ngDNA模板。反应程序为：94℃预变性5min；94℃