【摘 要】
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目的研究大鼠骨髓内皮祖细胞(EPC)分离、培养并向内皮细胞方向诱导分化的方法和条件。方法从大鼠骨髓中分离单个核细胞,经差速贴壁后取二次贴壁细胞选择性诱导培养2w。以Dil-
【机 构】
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复旦大学附属中山医院心脏外科-上海市心血管病研究所,上海市心血管病研究所中心实验室
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目的研究大鼠骨髓内皮祖细胞(EPC)分离、培养并向内皮细胞方向诱导分化的方法和条件。方法从大鼠骨髓中分离单个核细胞,经差速贴壁后取二次贴壁细胞选择性诱导培养2w。以Dil-ac-LDL、FITC-UEA-1双荧光染色法以及vWF、Flk-1免疫荧光染色法鉴定EPC;流式细胞术(FACS)检测EPC纯度;细胞培养液一氧化氮(NO)含量测定分析EPC功能。结果二次贴壁细胞经诱导培养后3d开始伸展,5d形成集落,7~10d增殖加速并出现条索状结构,2w大部分细胞呈多角形。Dil-ac-LDL、FITC-UEA-1双染,vWF及Flk-1免疫荧光染色阳性率均>70%。FACS检测其中vWF阳性细胞占77.93%,Flk-1阳性细胞占81.50%。二次贴壁并经诱导培养的细胞培养液中NO含量明显高于普通培养的细胞,但低于成熟内皮细胞(P<0.05)。结论大鼠骨髓富含EPC,体外诱导培养后可以表现出内皮细胞的部分特征。
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