论文部分内容阅读
【摘要】目的：建立暖胃舒乐片的质量标准。方法：采用TLC法鉴别处方中丹参、黄芪、白芍、延胡索、鸡屎藤、大红袍、五倍子、肉桂等药材；采用HPLC法测定处方芍药苷含量，Agilent Zorbax SB 4.6×150 mm，RP-18e（ 5 μm ）色谱柱，流动相为乙腈-水（ 15∶85 ），流速1.00 mL.min-1,检测波长230 nm。结果：芍药苷在0.084 - 0.84 μg范围内线性关系良好，相关系数r = 0.9999，平均加样回收率100.8 %,RSD为 2.6 % ( n = 6 )。结论：本方法简便，专属性强，结果准确，重现性好，可用于暖胃舒乐片的质量控制。
【关键词】暖胃舒乐片TLCHPLC质量标准
Quality specification standards of Nuanwei shule Tablet
Chao Hui1Wang Zhiping2
【Abstract】 Objective: to study on a quality specification standard of Nuanwei shule Tablet. Methods: red sage root,astragalus root,white peony root,corydalis tuber,fevervine herb,dahongpao,Chinese gall,cinnamon bark in this preparation were identified by TLC;The content of paeoniflorin in this preparation were determined by HPLC, Agilent Zorbax SB 4.6×150 mm,RP-18e（ 5μm ） was used. The mobile phase consisted of acetonitril-water ( 15:85 ), the velocity of flow was 1.00 mL.min-1.The detection wavelength was 230 nm. Results: The standard curve of paeoniflorin was linear in the range of 0.084 - 0.84 μg. The correlation coefficient was 0. 9999. The average recovery and RSD were 100.8 % and 2.6 % ( n = 6 ) respectively. Conclusion: Results obtained showed that it's a simple, reliable, accurate, specific and reproducibility method for the quality control of Nuanwei shule Tablet.
【Key words】 Nuanwei shule Tablet TLC HPLCquality standard
暖胃舒乐片由黄芪、白芍、丹参、延胡索、鸡矢藤、大红袍等十二味中药组成，具有温中补虚，调和肝脾，行气活血，止痛生肌的功能，用于脾胃虚寒及肝脾不和型胃溃疡，十二指肠溃疡，慢性胃炎。本标准收载于《中华人民共和国药品标准》（中药成方制剂）第八册，处方中大红袍药材标准收载于《中华人民共和国药典》1977年版第一部，为豆科植物毛杭子梢 campylotropis hirtellae ( Franch. ) Schindl.的干燥根，其余药材均收载于《中华人民共和国药典》2005年版第一部。为了更好的控制本品质量，参照药典方法［1］，采用TLC法鉴别黄芪、白芍、丹参、延胡索等药材，采用HPLC法测定芍药苷含量，质量标准研究比较全面，能有效控制本品质量。
1仪器与试药
Agilent 1100高效液相色谱仪；DAD检测器；7725i手动进样器；Chemstation 数据处理软件系统。CREST ULTRASONICS CLEANER( made in Malaysia,540 W,38.5 kHz )。ZF型紫外透射反射分析仪。乙腈为色谱纯，水为制备纯水，其他试剂均为分析纯。研究所用对照品均由中国药品生物制品检定所提供；暖胃舒乐片购于广州二天堂药店，由昆明生达制药有限公司生产，规格0.25g/片（批号20040612 ）。
2薄层鉴别
2.1丹参的鉴别:取本品，除去糖衣，研细，取10 g，加乙醇80 mL，加热回流30 min，放冷，滤过，滤液蒸至近干，残渣加30 mL水使溶解，用乙醚提取2次，每次20 mL，水液备用，合并乙醚液，挥干，残渣加乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取丹参对照药材1 g，加水100 mL，煎煮1 h，滤过，滤液浓缩至30 mL，同法制成对照药材溶液。再取原儿茶醛对照品，加乙醇制成0.5 mg.mL-1 的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（中国药典2005年版一部附录Ⅵ B）试验，吸取供试品溶液和对照药材溶液各5 μL、对照品溶液2 μL，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶H薄层板上，以氯仿-丙酮-甲酸(8∶1∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5 % 三氯化铁乙醇溶液，热风吹至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性无干扰，结果见图1 - A 。
2.2黄芪的鉴别:取2．1项下乙醚提取后的备用水溶液，用水饱和的正丁醇振摇提取3次，每次25 mL，合并正丁醇液，用1 % 氢氧化钠溶液洗涤3次，每次20 mL，再用正丁醇饱和的水洗涤2次，每次20 mL，取正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇1 mL使溶解，作为供试品溶液。另取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成1 mg.mL-1 的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（中国药典2005年版一部附录Ⅵ B）试验，吸取供试品溶液10 μL、对照品溶液5 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-醋酸乙酯-甲醇-水( 10∶20∶11∶5 )为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10 % 硫酸乙醇溶液，在105 ℃ 加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性无干扰，结果见图1 - B。
2.3白芍的鉴别:取本品，除去糖衣，研细，取10 g，置100 mL具塞三角瓶中，加乙醇80 mL，超声处理30 min，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加水5 mL水使溶解，用水饱和正丁醇30 mL提取，正丁醇液用水洗涤3次，每次20 mL，取正丁醇液蒸干，残渣加乙醇1 mL使溶解，作为供试品溶液）残渣加甲醇1 mL使溶解，作为供试品溶液。另取白芍对照药材，同法制成对照药材溶液。再芍药苷对照品，加甲醇制成1 mg.mL-1的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（中国药典2005年版一部附录Ⅵ B）试验，吸取供试品溶液10 μL、对照品溶液8 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-醋酸乙酯-甲醇-甲酸( 40∶5∶10∶0.2 )为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5 % 香草醛硫酸溶液，在105 ℃ 加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性无干扰，结果见图1 - C 。
2.4延胡索的鉴别:取本品，除去糖衣，研细，取4 g，置100 mL具塞三角瓶中，加水3 mL、浓氨水3 mL、氯仿30 mL，摇匀，超声处理30 min，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1 mL使溶解，作为供试品溶液。另取延胡索对照药材，同法制成对照药材溶液。再延胡索乙素对照品，加甲醇制成1 mg.mL-1 的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（中国药典2005年版一部附录Ⅵ B）试验，吸取供试品溶液10 μL、对照品溶液5 μL，分别点于同一以含1 % 氢氧化钠的羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以环己烷-氯仿-甲醇( 15∶6∶2 )为展开剂，展开，取出，晾干，置碘蒸气中熏。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。)为展开剂，预饱和30 min，展开，取出，晾干，以碘蒸气熏至斑点显色清晰。挥尽吸附的碘后，置紫外光灯（ 365 nm ）下检视，供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，阴性无干扰，结果见图1 - D 。
2.5鸡屎藤的鉴别:取本品，除去糖衣，研细，取2 g，加75 % 乙醇10 mL,温浸2 h,挥干,残渣加甲醇1 mL使溶解，作为供试品溶液。另鸡矢藤对照药材1 g,同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法（中国药典2005年版一部附录Ⅵ B）试验，吸取供试品溶液及对照药材溶液各2 μL，分别点于同一硅胶G板上,以氯仿-甲醇-浓氨试液( 4.5∶1∶0.4 ), 为展开剂，展开，取出，晾干。置紫外光灯（ 365 nm ）下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的荧光斑点，阴性无干扰，结果见图1 - E 。
2.6大红袍的鉴别:取本品，除去糖衣，研细，取3 g，加70％ 乙醇30 mL，超声处理10分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1 mL使溶解，作为供试品溶液。另取大红袍对照药材1 g，同法制成对照药材溶液。再取熊果酸对照品适量，加甲醇制成1 mg.mL-1的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（中国药典2005年版一部附录Ⅵ B）试验，吸取供试品溶液4 μL、对照品溶液及对照药材溶液各2 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯（水饱和）-甲酸乙酯-甲酸（ 10∶5∶0.5 ）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10 ％ 硫酸乙醇溶液，在105 ℃ 加热至斑点显色清晰。置紫外光灯（365 nm）下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的荧光斑点，阴性无干扰，结果见图1 - F 。
2.7五倍子的鉴别:取本品，除去糖衣，研细，取5 g，加甲醇20 mL,超声处理15 min, 滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1 mL使溶解，作为供试品溶液。另五倍子对照药材0.5 g 同法制成对照药材溶液。再取没食子酸对照品适量，加甲醇制成1 mg.mL-1的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（中国药典2005年版一部附录Ⅵ B）试验，吸取供试品溶液及对照药材溶液各2 μL，分别点于同一硅胶 GF254 板上,以氯仿-甲酸乙酯-甲酸( 5∶5∶1 ), 为展开剂，展开，取出，晾干。置紫外光灯（ 254 nm ）下检视，供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同的斑点，阴性无干扰，结果见图1 - G 。
2.8肉桂的鉴别:取本品，除去糖衣，研细，取5 g，置25 mL具塞三角瓶中，加醋酸乙酯10 mL，超声处理10 min，放冷，滤过，滤液挥至约0.5 mL，作为供试品溶液。另取桂皮醛对照品适量，用醋酸乙酯制成1 μg.mL-1的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（中国药典2005年版一部附录Ⅵ B）试验，吸取供试品溶液及对照品溶液各5 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-醋酸乙酯 ( 9∶1 )为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2,4-二硝基苯肼乙醇试液，放置至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性无干扰，结果见图1 - H。
图1 - A 丹参薄层色谱鉴别图1-原儿茶醛对照品； 2-丹参对照药材；3，4，5，6-供试品；7-阴性对照
Fig 1 - A TLC chromatograms of red sage root1-protocaechuic aldehyde refenrence standard;2- red sage root reference herb;3,4,5,6-sample;7-negative sample
图1 - B 黄芪薄层色谱鉴别图1-黄芪甲苷对照品；2，3，4，5-供试品；6-阴性对照
Fig 1 - BTLC chromatograms of astragalus root1-astragaloside IV refenrence standard; 2,3,4,5-sample;6-negative sample
图1 - C 白芍薄层色谱鉴别图1-芍药苷对照品； 2-白芍对照药材；3-阴性对照4，5，6，7-供试品
Fig 1 - CTLC chromatogramsof white peony root1- paeoniflorin refenrence standard;2- white peony root reference herb;3- negative sample; 4,5,6,7-sample
图1 - D 延胡索薄层色谱鉴别图1- 阴性对照；2-延胡索乙素对照品；3-延胡索对照药材；4，5，6，7-供试品
Fig 1 - DTLC chromatograms of corydalis tuber1-negative sample;2 -tetrahydropalmatine refenrence standard;3- corydalis tuberreference herb;4,5,6,7-sample
图1 - E 鸡屎藤薄层色谱鉴别图1-阴性对照；2-鸡屎藤对照药材；3，4，5，6-供试品
Fig 1 - ETLC chromatograms of fevervine herb1-negative sample;2- fevervine herb reference herb;3 4,5,6-sample
图1 - F 大红袍薄层色谱鉴别图1-阴性对照；2-大红袍对照药材；3，4，5-供试品
Fig 1 - FTLC chromatograms of dahongpao1-negative sample;2- dahongpao referenceherb;3 4,5-sample
图1 - G五倍子薄层色谱鉴别图1-阴性对照；2-没食子酸对照品；3-五倍子对照药材；4，5，6-供试品
Fig 1 - GTLC chromatograms of chinese gall1- negative sample;2-gallic acid fenrence standard;3- chinese gall reference herb;4,5,6-sample
图1 - H肉桂薄层色谱鉴别图1-阴性对照；2-桂皮醛对照品； 3，4，5，6-供试品
Fig 1 - HTLC chromatograms of cinnamon bark1- negative sample; 2-cinnamaldehyde refenrence standard; 3 4,5,6-sample
3含量测定
3.1溶液制备
3.1.1对照品溶液：精密称取经五氧化二磷减压干燥器中干燥36 h的芍药苷对照品4.2 mg，置10 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度。再精密量取1.0 mL，置10 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，得0.042 mg.mL-1 的溶液，即得。
3.1.2供试品溶液：取本品，除去糖衣，研细，再取0.6g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25 mL，称定重量，超声处理45 min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
3.1.3缺白芍阴性供试品溶液：按照处方比例制备缺赤芍的阴性样品，按“3.1.2”项下的方法制备，即得。
3.2色谱条件及系统适应性:Agilent Zorbax SB 4.6×150 mm,RP-18e（5μm），ODS预柱。流动相：乙腈-水（ 15：85 ）。流速：1.00 mL.min-1。柱温：30 ℃。检测波长：230 nm。灵敏度： 2.000 AUFS。取上述三种溶液各10 μL，注入高效液相色谱仪，按上述条件测定，芍药苷出峰时间约为5.6 min，芍药苷峰理论塔板数为3900，与其相邻色谱峰的分离度大于2.0，阴性供试品在芍药苷位置处无色谱峰，阴性供试品对测定无干扰。供试品色谱图见图2 - A, 对照品色谱图见图2 - B,阴性供试品色谱图见图2 - C。
图2. 样品（A）、对照品（B）及缺赤芍阴性样品（C）HPLC分析图
Fig2. Paeoniflorin HPLC chromatogram of sample ( A ) reference substance ( B ) and negative sample without white peony root ( C )
3.3线性范围:精密量取对照品溶液2.0，5.0，8.0，10.0，20.0 μL,注入高效液相色谱仪， 记录色谱图，测定其峰面积值，并以面积值（ A ）对样品量（ C ）进行回归，得回归方程：A = 1275.6 C + 14.683 r = 0.9999
试验结果表明在0.084 - 0.84 μg范围内，芍药苷峰面积与进样量有良好的线性关系。
3.4精密度试验:精密量取上述供试品溶液10 μL，重复进样6次，测定芍药苷峰面积值，其RSD值为1.4 %。
3.5稳定性试验:精密吸取供试品溶液，分别于0，1，2，4，8 h，进样10 μL，测定芍药苷峰面积值，其RSD值为1.6 %。试验表明，样品供试溶液8 h内稳定性良好。
3.6重现性试验:按拟订的测定方法，对同一批样品，分别制备6份供试品溶液，分别进样10 μL，测得峰面积值和含量相对标准偏差，其RSD值为2.64 %。试验结果表明，本方法重现性良好。
3.7回收率试验:取除去糖衣的本品粉末约0.3 g，分别添加芍药苷对照品0.42 mg(储备液1.0 mL )，按上述供试品溶液处理方法及测定条件平行操作，测得平均回收率为100.8 %，RSD=2.6 %。
3.8样品测定:按拟订的色谱条件，以对照品溶液与样品供试品溶液各10 μL，注入高效液相色谱仪，记录色谱图，按峰面积用外标法计算含量为0.45mg/片。
4讨论
4.1暖胃舒乐片由十二味中药组成，复杂的化学成分之间相互干扰，增加了本品质量标准研究的难度。通过对处方中所有药材进行TLC试验研究，因炮姜、砂仁等四味药材阴性有干扰，暂时未能建立其TLC鉴别方法；其余黄芪、白芍、丹参等八味药材均建立了 TLC鉴别方法，鉴定率66.6 %。
4.2含量测定供试品溶液的制备方法中超声处理时间的确定，按照“3.1.2”项下方法，称定4份样品，分别超声处理15，30，45，60 min，进样分析，结果分别为0.41，0.43，0.45，0.45mg/片，故确定超声处理45min。
4.3黄芪为本处方君药，常用HPLC - ELSD法测定黄芪甲苷的含量，ELSD检测器普及率不高。臣药白芍具有平肝止痛功能，采用HPLC - UV 法测定芍药苷的含量，仪器普及，方法实用。
4.4本实验建立的质量标准，方法简便，专属性强，结果准确，重现性好，可用于暖胃舒乐片的质量控制。
作者单位：510435广东省司法警察医院1
510000广州中医药大学科技产业园有限公司2
【关键词】暖胃舒乐片TLCHPLC质量标准
Quality specification standards of Nuanwei shule Tablet
Chao Hui1Wang Zhiping2
【Abstract】 Objective: to study on a quality specification standard of Nuanwei shule Tablet. Methods: red sage root,astragalus root,white peony root,corydalis tuber,fevervine herb,dahongpao,Chinese gall,cinnamon bark in this preparation were identified by TLC;The content of paeoniflorin in this preparation were determined by HPLC, Agilent Zorbax SB 4.6×150 mm,RP-18e（ 5μm ） was used. The mobile phase consisted of acetonitril-water ( 15:85 ), the velocity of flow was 1.00 mL.min-1.The detection wavelength was 230 nm. Results: The standard curve of paeoniflorin was linear in the range of 0.084 - 0.84 μg. The correlation coefficient was 0. 9999. The average recovery and RSD were 100.8 % and 2.6 % ( n = 6 ) respectively. Conclusion: Results obtained showed that it's a simple, reliable, accurate, specific and reproducibility method for the quality control of Nuanwei shule Tablet.
【Key words】 Nuanwei shule Tablet TLC HPLCquality standard
暖胃舒乐片由黄芪、白芍、丹参、延胡索、鸡矢藤、大红袍等十二味中药组成，具有温中补虚，调和肝脾，行气活血，止痛生肌的功能，用于脾胃虚寒及肝脾不和型胃溃疡，十二指肠溃疡，慢性胃炎。本标准收载于《中华人民共和国药品标准》（中药成方制剂）第八册，处方中大红袍药材标准收载于《中华人民共和国药典》1977年版第一部，为豆科植物毛杭子梢 campylotropis hirtellae ( Franch. ) Schindl.的干燥根，其余药材均收载于《中华人民共和国药典》2005年版第一部。为了更好的控制本品质量，参照药典方法［1］，采用TLC法鉴别黄芪、白芍、丹参、延胡索等药材，采用HPLC法测定芍药苷含量，质量标准研究比较全面，能有效控制本品质量。
1仪器与试药
Agilent 1100高效液相色谱仪；DAD检测器；7725i手动进样器；Chemstation 数据处理软件系统。CREST ULTRASONICS CLEANER( made in Malaysia,540 W,38.5 kHz )。ZF型紫外透射反射分析仪。乙腈为色谱纯，水为制备纯水，其他试剂均为分析纯。研究所用对照品均由中国药品生物制品检定所提供；暖胃舒乐片购于广州二天堂药店，由昆明生达制药有限公司生产，规格0.25g/片（批号20040612 ）。
2薄层鉴别
2.1丹参的鉴别:取本品，除去糖衣，研细，取10 g，加乙醇80 mL，加热回流30 min，放冷，滤过，滤液蒸至近干，残渣加30 mL水使溶解，用乙醚提取2次，每次20 mL，水液备用，合并乙醚液，挥干，残渣加乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取丹参对照药材1 g，加水100 mL，煎煮1 h，滤过，滤液浓缩至30 mL，同法制成对照药材溶液。再取原儿茶醛对照品，加乙醇制成0.5 mg.mL-1 的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（中国药典2005年版一部附录Ⅵ B）试验，吸取供试品溶液和对照药材溶液各5 μL、对照品溶液2 μL，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶H薄层板上，以氯仿-丙酮-甲酸(8∶1∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5 % 三氯化铁乙醇溶液，热风吹至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性无干扰，结果见图1 - A 。
2.2黄芪的鉴别:取2．1项下乙醚提取后的备用水溶液，用水饱和的正丁醇振摇提取3次，每次25 mL，合并正丁醇液，用1 % 氢氧化钠溶液洗涤3次，每次20 mL，再用正丁醇饱和的水洗涤2次，每次20 mL，取正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇1 mL使溶解，作为供试品溶液。另取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成1 mg.mL-1 的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（中国药典2005年版一部附录Ⅵ B）试验，吸取供试品溶液10 μL、对照品溶液5 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-醋酸乙酯-甲醇-水( 10∶20∶11∶5 )为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10 % 硫酸乙醇溶液，在105 ℃ 加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性无干扰，结果见图1 - B。
2.3白芍的鉴别:取本品，除去糖衣，研细，取10 g，置100 mL具塞三角瓶中，加乙醇80 mL，超声处理30 min，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加水5 mL水使溶解，用水饱和正丁醇30 mL提取，正丁醇液用水洗涤3次，每次20 mL，取正丁醇液蒸干，残渣加乙醇1 mL使溶解，作为供试品溶液）残渣加甲醇1 mL使溶解，作为供试品溶液。另取白芍对照药材，同法制成对照药材溶液。再芍药苷对照品，加甲醇制成1 mg.mL-1的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（中国药典2005年版一部附录Ⅵ B）试验，吸取供试品溶液10 μL、对照品溶液8 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-醋酸乙酯-甲醇-甲酸( 40∶5∶10∶0.2 )为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5 % 香草醛硫酸溶液，在105 ℃ 加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性无干扰，结果见图1 - C 。
2.4延胡索的鉴别:取本品，除去糖衣，研细，取4 g，置100 mL具塞三角瓶中，加水3 mL、浓氨水3 mL、氯仿30 mL，摇匀，超声处理30 min，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1 mL使溶解，作为供试品溶液。另取延胡索对照药材，同法制成对照药材溶液。再延胡索乙素对照品，加甲醇制成1 mg.mL-1 的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（中国药典2005年版一部附录Ⅵ B）试验，吸取供试品溶液10 μL、对照品溶液5 μL，分别点于同一以含1 % 氢氧化钠的羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以环己烷-氯仿-甲醇( 15∶6∶2 )为展开剂，展开，取出，晾干，置碘蒸气中熏。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。)为展开剂，预饱和30 min，展开，取出，晾干，以碘蒸气熏至斑点显色清晰。挥尽吸附的碘后，置紫外光灯（ 365 nm ）下检视，供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，阴性无干扰，结果见图1 - D 。
2.5鸡屎藤的鉴别:取本品，除去糖衣，研细，取2 g，加75 % 乙醇10 mL,温浸2 h,挥干,残渣加甲醇1 mL使溶解，作为供试品溶液。另鸡矢藤对照药材1 g,同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法（中国药典2005年版一部附录Ⅵ B）试验，吸取供试品溶液及对照药材溶液各2 μL，分别点于同一硅胶G板上,以氯仿-甲醇-浓氨试液( 4.5∶1∶0.4 ), 为展开剂，展开，取出，晾干。置紫外光灯（ 365 nm ）下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的荧光斑点，阴性无干扰，结果见图1 - E 。
2.6大红袍的鉴别:取本品，除去糖衣，研细，取3 g，加70％ 乙醇30 mL，超声处理10分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1 mL使溶解，作为供试品溶液。另取大红袍对照药材1 g，同法制成对照药材溶液。再取熊果酸对照品适量，加甲醇制成1 mg.mL-1的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（中国药典2005年版一部附录Ⅵ B）试验，吸取供试品溶液4 μL、对照品溶液及对照药材溶液各2 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯（水饱和）-甲酸乙酯-甲酸（ 10∶5∶0.5 ）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10 ％ 硫酸乙醇溶液，在105 ℃ 加热至斑点显色清晰。置紫外光灯（365 nm）下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的荧光斑点，阴性无干扰，结果见图1 - F 。
2.7五倍子的鉴别:取本品，除去糖衣，研细，取5 g，加甲醇20 mL,超声处理15 min, 滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1 mL使溶解，作为供试品溶液。另五倍子对照药材0.5 g 同法制成对照药材溶液。再取没食子酸对照品适量，加甲醇制成1 mg.mL-1的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（中国药典2005年版一部附录Ⅵ B）试验，吸取供试品溶液及对照药材溶液各2 μL，分别点于同一硅胶 GF254 板上,以氯仿-甲酸乙酯-甲酸( 5∶5∶1 ), 为展开剂，展开，取出，晾干。置紫外光灯（ 254 nm ）下检视，供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同的斑点，阴性无干扰，结果见图1 - G 。
2.8肉桂的鉴别:取本品，除去糖衣，研细，取5 g，置25 mL具塞三角瓶中，加醋酸乙酯10 mL，超声处理10 min，放冷，滤过，滤液挥至约0.5 mL，作为供试品溶液。另取桂皮醛对照品适量，用醋酸乙酯制成1 μg.mL-1的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（中国药典2005年版一部附录Ⅵ B）试验，吸取供试品溶液及对照品溶液各5 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-醋酸乙酯 ( 9∶1 )为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2,4-二硝基苯肼乙醇试液，放置至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性无干扰，结果见图1 - H。
图1 - A 丹参薄层色谱鉴别图1-原儿茶醛对照品； 2-丹参对照药材；3，4，5，6-供试品；7-阴性对照
Fig 1 - A TLC chromatograms of red sage root1-protocaechuic aldehyde refenrence standard;2- red sage root reference herb;3,4,5,6-sample;7-negative sample
图1 - B 黄芪薄层色谱鉴别图1-黄芪甲苷对照品；2，3，4，5-供试品；6-阴性对照
Fig 1 - BTLC chromatograms of astragalus root1-astragaloside IV refenrence standard; 2,3,4,5-sample;6-negative sample
图1 - C 白芍薄层色谱鉴别图1-芍药苷对照品； 2-白芍对照药材；3-阴性对照4，5，6，7-供试品
Fig 1 - CTLC chromatogramsof white peony root1- paeoniflorin refenrence standard;2- white peony root reference herb;3- negative sample; 4,5,6,7-sample
图1 - D 延胡索薄层色谱鉴别图1- 阴性对照；2-延胡索乙素对照品；3-延胡索对照药材；4，5，6，7-供试品
Fig 1 - DTLC chromatograms of corydalis tuber1-negative sample;2 -tetrahydropalmatine refenrence standard;3- corydalis tuberreference herb;4,5,6,7-sample
图1 - E 鸡屎藤薄层色谱鉴别图1-阴性对照；2-鸡屎藤对照药材；3，4，5，6-供试品
Fig 1 - ETLC chromatograms of fevervine herb1-negative sample;2- fevervine herb reference herb;3 4,5,6-sample
图1 - F 大红袍薄层色谱鉴别图1-阴性对照；2-大红袍对照药材；3，4，5-供试品
Fig 1 - FTLC chromatograms of dahongpao1-negative sample;2- dahongpao referenceherb;3 4,5-sample
图1 - G五倍子薄层色谱鉴别图1-阴性对照；2-没食子酸对照品；3-五倍子对照药材；4，5，6-供试品
Fig 1 - GTLC chromatograms of chinese gall1- negative sample;2-gallic acid fenrence standard;3- chinese gall reference herb;4,5,6-sample
图1 - H肉桂薄层色谱鉴别图1-阴性对照；2-桂皮醛对照品； 3，4，5，6-供试品
Fig 1 - HTLC chromatograms of cinnamon bark1- negative sample; 2-cinnamaldehyde refenrence standard; 3 4,5,6-sample
3含量测定
3.1溶液制备
3.1.1对照品溶液：精密称取经五氧化二磷减压干燥器中干燥36 h的芍药苷对照品4.2 mg，置10 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度。再精密量取1.0 mL，置10 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，得0.042 mg.mL-1 的溶液，即得。
3.1.2供试品溶液：取本品，除去糖衣，研细，再取0.6g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25 mL，称定重量，超声处理45 min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
3.1.3缺白芍阴性供试品溶液：按照处方比例制备缺赤芍的阴性样品，按“3.1.2”项下的方法制备，即得。
3.2色谱条件及系统适应性:Agilent Zorbax SB 4.6×150 mm,RP-18e（5μm），ODS预柱。流动相：乙腈-水（ 15：85 ）。流速：1.00 mL.min-1。柱温：30 ℃。检测波长：230 nm。灵敏度： 2.000 AUFS。取上述三种溶液各10 μL，注入高效液相色谱仪，按上述条件测定，芍药苷出峰时间约为5.6 min，芍药苷峰理论塔板数为3900，与其相邻色谱峰的分离度大于2.0，阴性供试品在芍药苷位置处无色谱峰，阴性供试品对测定无干扰。供试品色谱图见图2 - A, 对照品色谱图见图2 - B,阴性供试品色谱图见图2 - C。
图2. 样品（A）、对照品（B）及缺赤芍阴性样品（C）HPLC分析图
Fig2. Paeoniflorin HPLC chromatogram of sample ( A ) reference substance ( B ) and negative sample without white peony root ( C )
3.3线性范围:精密量取对照品溶液2.0，5.0，8.0，10.0，20.0 μL,注入高效液相色谱仪， 记录色谱图，测定其峰面积值，并以面积值（ A ）对样品量（ C ）进行回归，得回归方程：A = 1275.6 C + 14.683 r = 0.9999
试验结果表明在0.084 - 0.84 μg范围内，芍药苷峰面积与进样量有良好的线性关系。
3.4精密度试验:精密量取上述供试品溶液10 μL，重复进样6次，测定芍药苷峰面积值，其RSD值为1.4 %。
3.5稳定性试验:精密吸取供试品溶液，分别于0，1，2，4，8 h，进样10 μL，测定芍药苷峰面积值，其RSD值为1.6 %。试验表明，样品供试溶液8 h内稳定性良好。
3.6重现性试验:按拟订的测定方法，对同一批样品，分别制备6份供试品溶液，分别进样10 μL，测得峰面积值和含量相对标准偏差，其RSD值为2.64 %。试验结果表明，本方法重现性良好。
3.7回收率试验:取除去糖衣的本品粉末约0.3 g，分别添加芍药苷对照品0.42 mg(储备液1.0 mL )，按上述供试品溶液处理方法及测定条件平行操作，测得平均回收率为100.8 %，RSD=2.6 %。
3.8样品测定:按拟订的色谱条件，以对照品溶液与样品供试品溶液各10 μL，注入高效液相色谱仪，记录色谱图，按峰面积用外标法计算含量为0.45mg/片。
4讨论
4.1暖胃舒乐片由十二味中药组成，复杂的化学成分之间相互干扰，增加了本品质量标准研究的难度。通过对处方中所有药材进行TLC试验研究，因炮姜、砂仁等四味药材阴性有干扰，暂时未能建立其TLC鉴别方法；其余黄芪、白芍、丹参等八味药材均建立了 TLC鉴别方法，鉴定率66.6 %。
4.2含量测定供试品溶液的制备方法中超声处理时间的确定，按照“3.1.2”项下方法，称定4份样品，分别超声处理15，30，45，60 min，进样分析，结果分别为0.41，0.43，0.45，0.45mg/片，故确定超声处理45min。
4.3黄芪为本处方君药，常用HPLC - ELSD法测定黄芪甲苷的含量，ELSD检测器普及率不高。臣药白芍具有平肝止痛功能，采用HPLC - UV 法测定芍药苷的含量，仪器普及，方法实用。
4.4本实验建立的质量标准，方法简便，专属性强，结果准确，重现性好，可用于暖胃舒乐片的质量控制。
作者单位：510435广东省司法警察医院1
510000广州中医药大学科技产业园有限公司2