【摘 要】
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目的 微小RNA-363(miR-363)对人血管平滑肌细胞(VSMCs)的增殖及迁移的调控,并探讨其影响VSMCs生物学行为的机制.方法 30 μg/L血小板源性生长因子-BB(PDGF-BB)诱导原代培养的人VSMCs表型转化,实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测miR-363含量变化.miR-363模拟物及阴性对照(miR-NC)转染VSMCs,细胞计数试剂盒(CCK-8)和Tran
【机 构】
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200011上海交通大学医学院附属第九人民医院血管外科上海交通大学医学院血管病诊治中心,200011上海交通大学医学院附属第九人民医院血管外科上海交通大学医学院血管病诊治中心,200011上海交通大学
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目的 微小RNA-363(miR-363)对人血管平滑肌细胞(VSMCs)的增殖及迁移的调控,并探讨其影响VSMCs生物学行为的机制.方法 30 μg/L血小板源性生长因子-BB(PDGF-BB)诱导原代培养的人VSMCs表型转化,实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测miR-363含量变化.miR-363模拟物及阴性对照(miR-NC)转染VSMCs,细胞计数试剂盒(CCK-8)和Transwell法分别检测细胞增殖、迁移,Western blot法检测表型标志蛋白的表达.生物信息学方法分析miR-363靶基因,Western blot法检测.结果 PDGF-BB刺激72 h后VSMCs向合成型表型改变,表型标志蛋白α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达下调28％ (P＜0.05),碱性调宁蛋白(Calponin-1)无显著改变,miR-363的表达量下调70％ (P＜0.01).与miR-NC组比较,在72 h,过表达miR-363组VSMCs增殖抑制32％ (P ＜0.05),迁移抑制30％(P＜0.05);且miR-363的靶基因Kruppel样因子4(KLF4)蛋白表达在转染24、48、72 h后分别降低19％ (P ＜0.05)、52％ (P＜0.01)和37％ (P＜0.01),而其表型标志蛋白α-SMA、Calponin-1表达无明显变化.结论 miR-363可抑制人VSMCs的增殖和迁移,其作用可能是通过靶向KLF4来实现的。
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