检测猪繁殖与呼吸综合征病毒和猪圆环病毒的二重荧光LAMP方法的建立

来源 :中国兽药杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户:bleachji
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建立一种二重荧光LAMP的检测猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)和猪圆环病毒(PCV)的快速诊断技术.根据已发表的PRRSV NSP2基因和PCV2 ORF2基因序列保守区域,分别设计并合成了两组针对PRRSV和PCV2序列的特异性引物和两条探针,两条探针分别标记不同的荧光基团,PRRSV-Probe 5端标记FAM荧光基团,3端标记BHQ1淬灭基团,PCV-Probe 5端标记CY5.5荧光基团,3端标记BHQ2淬灭基团.对组成反应体系中的引物、探针以及反应试剂进行优化,建立了二重荧光LAMP检测PRRSV和PCV2方法.对建立的方法进行特异性和敏感性测试,并用模拟混合样品和临床样品进行检测验证.结果显示,本研究建立的方法可以鉴别区分PRRSV和PCV2,特异性试验表明该方法只检测出PRRSV或PCV2,且与参试的对照病毒无交叉反应,特异性好.敏感性测试表明该方法最低检测PRRSV或PCV为100拷贝,敏感性好.对临床样品的检测,结果与荧光定量PCR方法检测结果一致.本研究建立的PRRSV和PCV2二重荧光LAMP检测方法,具有良好的特异性和敏感性,可用于临床样品中检测PRRSV和PCV2.
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