【摘 要】
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目的 观察C反应蛋白(CRP)对体外培养骨髓源性内皮祖细胞(EPC)数量及增殖、迁移、黏附功能的影响及其机制探讨. 方法 密度梯度离心法获取骨髓单个核细胞,FITC-荆豆凝集紊I、Di
【机 构】
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第三军医大学新桥医院全军心血管内科中心,重庆,400037
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目的 观察C反应蛋白(CRP)对体外培养骨髓源性内皮祖细胞(EPC)数量及增殖、迁移、黏附功能的影响及其机制探讨. 方法 密度梯度离心法获取骨髓单个核细胞,FITC-荆豆凝集紊I、DiI-乙酰化低密度脂蛋白荧光双染鉴定.单个核细胞培养7 d后进行实验分组,分为对照组和CRP干预组.CRP干预组加入不同浓度CRP(分别为5、10、15、20 μg/ml)培养48 h,然后分别采用四氮唑溴盐比色法、改良的Boyden小室和黏附能力测定来观察EPC的增殖、迁移和黏附能力.RT-PCR检测不同浓度下CRP对EPC内皮型一氧化氮合酶(eNOS)mRNA的影响,并检测EPC的NOS活性. 结果 CRP(分别为5、10、15、20 μg/ml)各组EPC数量分别为(58±3)、(54±3)、(47±3)和(39±5)个,对照组EPC数量为(60±3)个.MTT法检测CRP各亚组EPC在490 nm吸光度值分别为0.332±0.003、0.297±0.036、0.273±0.013和0.259±0.035,对照组为0.345±0.014.CRP浓度为10、15、20μ/ml 3个亚组EPC的数量及增殖能力显著低(P＜0.01).CRP各组(10、15、20 μg/ml)与对照组相比EPC黏附数量明显低[(28±2)、(22±3)、(19±3)和(16±2)个比(30±2)个,P＜0.05].不同浓度CRP各组与对照组相比EPC迁移数量明显低[(11±2)、(9±2)、(6±2)和(5±1)个比(12±2)个,P＜0.05].CRP各亚组(5、10、15、20μg/ml)EPC eNOS mRNA相对光密度显著低于对照组.CRP呈剂量依赖性降低EPC NOS活性,CRP各组EPC的NOS活性分别为(66.29±1.81)、(57.44±3.25)、(48.37±3.86)和(36.82±4.89)nmol/mg蛋白,对照组EPC NOS活性为(68.56±2.82)nmol/mg蛋白,其中浓度为10、15、20μg/ml CRP组与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.01). 结论 CRP可能通过影响EPC eNOS表达活性降低EPC数量并影响其部分生物学功能.
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