【摘 要】
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用PCR突变的方法使人白血病抑制因子基因的终止密码子缺失, 并与质粒pPICZαA 上的%myc%表位及6个组氨酸处于同一读码框,构建融合表达载体pPICZαA-hLIF+M.通过氯化锂化学转
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用PCR突变的方法使人白血病抑制因子基因的终止密码子缺失, 并与质粒pPICZαA 上的%myc%表位及6个组氨酸处于同一读码框,构建融合表达载体pPICZαA-hLIF+M.通过氯化锂化学转化法使表达载体整合到毕赤巴斯德酵母X-33的基因组DNA中,转化子经甘油增菌和甲醇诱导,实现了hLIF基因在毕赤酵母表达载体系统中的表达.SDS-PAGE检测和Western blot分析结果表明在相对分子质量为61 000处有一条人白血病抑制因子特异蛋白带.凝胶薄层扫描分析结果显示表达的目的蛋白占培养液上清总蛋白的33.3%. 且该表达产物具有抑制小鼠畸胎瘤细胞F9克隆形成的活性.
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