【摘 要】
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本研究根据口蹄疫病毒(FMDV)VP1基因的序列,设计并合成了1对用于扩增整个VP1基因的引物(5P、P6).从细胞培养液或组织中提取总RNA,通过PT-PCR扩增,从F29株、O3I3株和T509株中
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本研究根据口蹄疫病毒(FMDV)VP1基因的序列,设计并合成了1对用于扩增整个VP1基因的引物(5P、P6).从细胞培养液或组织中提取总RNA,通过PT-PCR扩增,从F29株、O3I3株和T509株中均获得了1条约740bp的DNA电泳带.将PCR产物双酶切后电泳回收,插入到相应双酶切的pUC18质粒中,获得了重组质粒.通过PCR鉴定,证明重组质粒pUCVP1/F29、pUCVP1/O313、pUCVP1/T509均插入了VP1基因.对上述3个重组质粒进行测序后分析,F29强毒株与O3I3、T509弱毒株相比,其核苷酸序列同源性分别为98.75%和99.06%;因F29株核苷酸发生3个碱基缺失与1个碱基替换,故推导的氨基酸序列同源性分别仅为44.13%和41.32%;而T509株与O3I3株相比,其核苷酸、氨基酸序列同源性分别为99.37%和95.31%.通过序列分析发现,本研究的3个毒株与国内大多数毒株(包括1997年台湾暴发FMDV所分离的毒株,除O/A/58株外)均属于同一基因型,核苷酸序列同源性为85%～94%;而与国外毒株相比,属不同的基因型,核苷酸序列同源性仅为81%～82%.其推导的氨基酸序列,除F29株与O/HK/93株及1997年台湾暴发FMDV分离的少数毒株的氨基酸序列同源性仅为45%～63%外,本研究的3个毒株与国内分离的大多数毒株的VP1基因的氨基酸序列同源性高达87%～95%.本项研究对猪O型FMDV的强弱毒株VP基因进行克隆与序列分析,将进一步丰富我国FMDV毒株VP1基因资料库,为更加科学地防制FMD提供分子水平依据.
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