微小RNA–195在糖尿病心肌病乳鼠心肌肥大中的作用及其机制

• 作 者: 孔彪 沈冬丽 芮涛 张国辉
• 机 构: 212002 镇江，江苏大学附属人民医院心内科,212002 镇江，江苏大学附属人民医院心内科,212002 镇江，江苏大学附属人民医院心内科,212002 镇江，江苏大学附属人民医院心内科,
• 出 处: 中华心血管病杂志
• 发表日期: 2015年43期
• 关键词: 糖尿病 心肌疾病 微RNAs

目的

研究微小RNA(miRNA)–195在糖尿病心肌病心肌肥大中的作用及其机制。

方法

应用TargetScan5.1软件预测Smad7为miRNA–195发挥作用的潜在靶点。分离原代SD乳鼠心肌细胞进行培养，贴壁后将原代心肌细胞分为3组，正常对照组心肌细胞用浓度为5 mmol/L葡萄糖培养，高糖对照组心肌细胞用浓度为25 mmol/L葡萄糖培养，实验组心肌细胞经miRNA–195抑制剂转染后用浓度为25 mmol/L葡萄糖培养。培养24、48和72 h时，于倒置相差显微镜下观察心肌细胞形态学变化，并拍照计算心肌细胞表面积，采用逆转录实时定量聚合酶链反应(RT–PCR)检测心肌细胞miRNA–195和心肌肥大基因β–肌球蛋白重链(β–MHC)mRNA的表达，采用蛋白质印迹(Western blot)法检测心肌细胞中Smad7蛋白的表达，采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组细胞培养上清液中转化生长因子(TGF)–β₁浓度。通过抑制miRNA–195表达，观察其对Smad7、β–MHC表达及心肌肥大的影响。

结果

高糖对照组各时点miRNA–195表达水平均高于正常对照组(P均<0.05)，培养48 h时高糖对照组Smad7蛋白表达水平低于正常对照组(P<0.05)，而实验组miRNA–195表达水平低于高糖对照组，Smad7蛋白表达水平则高于高糖对照组(P<0.05)。高糖对照组心肌细胞经高糖处理后，Smad7表达与miRNA–195表达呈显著负相关(相关系数为–0.945，P<0.05)。培养48 h时高糖对照组TGF–β₁浓度高于正常对照组(P<0.05)，与相同时间点高糖对照组比较，实验组TGF–β₁浓度则均较低(P均<0.05)。随培养时间的延长，高糖刺激使心肌细胞表面积、β–MHC mRNA表达逐渐增高，其变化趋势与miRNA195表达情况一致。

结论

miRNA–195在糖尿病心肌病心肌肥大的发生、发展过程中具有重要作用，其机制可能与下调靶蛋白Smad7表达有关。