富甘氨酸果蝇抗菌肽在大肠杆菌中的直接表达和纯化

• 作 者: 冯志国 陆婕 郎君 李燕娇 陈正望
• 机 构: 华中科技大学分子生物物理教育部重点实验室,信阳师范学院生命科学学院
• 出 处: 生物技术通报
• 发表日期: 2009年3期
• 关键词: 果蝇 富甘氨酸抗菌肽 直接表达 纯化 葡萄糖效应 Drosophila Glysine-rich peptides Direct expression Puri
• 基金项目: 国家自然科学基金（30370647）

利用RT—PCR技术从果蝇总RNA中克隆出富甘氨酸果蝇抗菌肽基因，将该基因插入原核表达载体pET-32a（＋）的Nde I和Xho I酶切位点之间，然后用重组质粒转化大肠杆菌BL21（DE3）利用乳糖操纵子的葡萄糖效应IPTG诱导表达，经15％SDS—PAGE、Western blot分析，在大约8kD处出现了含6×His标签的抗菌肽蛋白。再以Ni—N TA纯化树脂进行亲和层析、脱盐、冻干，成功制备了富甘氨酸果蝇抗菌肽蛋白。